Kísérleti munka allogén keratinociták fehér patkányok mesterségesen létrehozott hegeire történő átültetésével kapcsolatban

A celluláris potenciál felhasználásának vágya és a sebek esztétikai megjelenését javító új hatékony módszerek keresése arra a gondolatra vezetett, hogy megpróbálják tanulmányozni a keratinocita transzplantáció lehetőségét a hegesedő felületekre.

Annak bizonyítására, hogy a lehetőségét, hogy keratinocyte kultúra növelése a hegek kísérleti munkát végeztek, fehér laboratóriumi patkányok, amelyek hoztak létre heg felületre. A hegesedés modell patkányokat elő mesterségesen gyógyuló sebek a hátán, a gerincoszlop mentén,. A patkányokat vágott darab azonos bőr, mérete 2x3 cm. Miután 2,5 hónappal a műtét után „szimulációs hegesedés” patkányok végeztük dermabrázió műtét (eltávolítása a felső rétegek keresztül ignioperation bendő) és transzplantált allogén keratinociták, izolált bőr fiatal patkányok 2-4 nap születés után.

A patkány epidermociták izolálását és növekedését a következő technológiák CETR laboratóriumában végeztük el.

A bőrt mossuk Hank-féle sóoldatban, amely 200 egység / ml gentamicinnel, kis darabokra vágva, területe 0,2-0,5 cm ². A bőrdube-ket 0,5% -os disaszpaáz-oldatban inkubáltuk kiegyensúlyozott fiziológiás sóoldat-foszfát pufferoldatban 37 ° C-on egy órán át. A darabokat ezután átvisszük Dulbecco foszfáttal pufferolt sóoldatába, és az epidermiszet elválasztjuk a dermistől. Az epidermisz-ben inkubáltuk 0,125% tripszin oldattal 10-15 percig keverés közben sebességgel 50 fordulat / perc, ami után az enzim hozzáadásával leállítottuk, 5% magzati borjú szérumot. Egyharmada a kapott sejt-szuszpenziót használható tiszta formában, az egyik lehetőség, hogy transzplantáció hegek, a második a harmadik termesztett hazai biokompatibilis filmbevonat „Polipor”, a harmadik - a Petri-csészébe nélkül szubsztrát. A patkányokban előforduló sebek dermabráziójának kezelését a patkány epidermociták későbbi átültetésével éteres érzéstelenítéssel végezték hőkezeléssel.

Az első csoportba tartozó patkányok után dermabrázió polírozott, sóoldattal mossuk és szárítjuk felülete steril bendőjében egymásra darab gyep, amelyet letétbe bitsorkódolt allogén patkány epidermotsitov zagy koncentrációja 1,5 millió sejt per 1 ml (az Institute of Citológia). Batiszt darab halmozott csiszolt heg így a sejtek felületén kialakított a heg. Kötést tetején több réteg gézen, amelynek van varrva a széleit a heg.

Az így kapott sejtszuszpenzió egy részét Petri-csészékbe szélesztettük, és a csészék alakjában levő, steril Polypore-fóliákra festettük, a másik pedig a Petri-csészék nélkül. A tenyésztést egy DMEM és F12 keverékből álló FAD tápközegben végeztük 3: 1 arányban. Kiegészítve 10% magzati borjú szérumot, 5 ug / ml inzulinnal (Sigma), 0,5mkg / ml hidrokortizon-hemiszukcinát (Sigma). 10 μg / ml epidermális növekedési faktor EGF (Institute of Cytology RAS, St. Petersburg). A patkányok második és harmadik csoportját 7 egyednél 6 nappal az első után kezeltük. Ez idő alatt többrétegű rétegeket képeztek a vetett keratinociták szuszpenziójából Petri-csészékben, amelyeket patkányokba transzplantáltunk. A második csoportot epidermocitákkal transzplantálták a filmen, a harmadik csoportot - egy többrétegű réteggel szubsztrát nélkül. 7 nap múlva a Polypore-fóliákra vetett alogikus keratinociták (MPALK) többrétegű rétegeit közvetlenül a sebfelszínre vetettük át. Abban a filmben, annak érdekében, hogy elkerüljék a rippelést, rögzítették egy többrétegű géz-öntettel és varrtak a patkányok bőrére.

Kiültetés előtt keratinociták harmadik patkány csoport, termesztett nélkül a szubsztrát, ami egy elválasztása PAC aljáról a Petri-csésze diszpáz kezelést, amelyek képesek szelektíven megtörni a dermo-epidermális kommunikáció. Az intézkedés alapján a többrétegű tartály dispáz tönkreteszi a kapcsolatot a bazális sejtréteg, hogy az alján a Petri-csésze és sokkal kisebb mértékben befolyásolja a sejtközi kommunikáció, amely lehetővé teszi, hogy az „eltávolítás” az egész réteg. Leválása a többrétegű sejtek képződését diszpáz végeztük az alábbiak szerint. Petri-csészéből származó kevert szállítási közeget, a sejtrétegeket háromszor mostuk tartalmazó tápközeggel antibiotikumok, különösen a - gentamicin (0,2 mg / ml). Többrétegű fázisokat öntjük 0,125% diszpáz oldatot ( «Sigma»), és inkubátorba helyezzük, ahol inkubáljuk azokat t = 37 ° C-on 20-30 percig. A megjelenése fehér corolla, peeling kerülete körül a tározó - jelzi a folyamat elején az elkülönítve azt az élek és az alján a Petri-csészébe. Néhány perc után a kezdete elválasztási eljárás, diszpáz oldatot kiürítjük 2-3-szor epiteliális fázisokat közegben. A felszínen az epidermális réteget alkalmazva, méretre vágott csésze darab steril sebkötöző „Leith-szín, amelynek lehasítása elválasztjuk diszpáz képződését, továbbá szétválását az alján a csésze egy spatulával. Szemészetialkalmazású csipesz réteg együtt a bevonattal a betét” Leith-színes „(Russian ) elszakadtak az alján egy Petri-csészébe, és óvatosan átvisszük az előkészített felület a heg. Szalvéták „Lita-színes” tartalmaz annak összetétele és gentamicin eksolin (kollagén kivonat), amely, ha nedves környezetben marad csíra a jövőben Shem sóoldat megduzzadt, és vált a modern seb bevonat, amely megfelelő védelmet a külső fertőzés és a gyors gyógyulás miatt befogadó nedvesítéssel szerkezettel.

A Polyprop-filmeket és a Lita-színű szalvétákat gézszalagokkal rétegeztük, amelyeket a patkányok bőrére varrtak a tartósabb rögzítés érdekében. Mindegyik patkányt külön ketrecbe ültettük, hogy optimális feltételeket teremtsünk az átültetett keratinociták fenntartásához és felépítéséhez. Pólyák patkányokat, hogy a transzplantált felfüggesztés és többrétegű tartály epidermotsitov lövés diszpáz, minden nap naponta többször, megnedvesített steril sóoldat, hogy megteremtse a legkedvezőbb feltételeket a sejtek számára a megtapadást. Tekintettel arra, hogy „Polipor” film át nem eresztő víz, a patkányok, a második csoport nedvesítési kötszerek nem végezzük el, amely az egyik előnye a filmek előzetes transzplantáció. 10 nap elteltével a kötéseket eltávolítottuk. A klinikai kép, a hegesedés a transzplantációt követően a sejtek nem különbözött lényegesen a transzplantációs hegesedés nélkül, kivéve a rózsaszín kiszínezésükkel (a dermabrázió) és hámlás. Ez a tény azt sugallja. Hogy a sebfelületek IPC-vel történő eltűnését követően a bendőben nem történt változás.

Biopsziás anyagot patkányokban.

Miután 1, 2, 5 és 9 hónappal az átültetés után a keratinociták patkány allogichnyh földön hegek fehér patkányok, vesz egy előállított anyag szövettani, citomorfológiai és elektronmikroszkópos vizsgálat. Mint normál patkány bőr és heg sebészeti mintái vettek át sejtek átültetése nélkül. A patkányok érzéstelenítését éteres érzéstelenítéssel végeztük.

Anesztézia után a megjelölt területekről, amelyekbe a keratinocitákat átültetették, 2 mm átmérőjű biopsziás lyukasztó. A hegszövetdarabokat vettük és 2,5% -os glutáraldehid oldatba helyeztük az anyag elektronmikroszkópos elkészítéséhez. Darab szövet vett szövettani vizsgálatra kerültek 10% -os semleges formalin-oldattal, majd Átmenő vezetékezés alkoholok és kitöltött paraffin, majd vágás ultravékony szakaszok és tekintenek rájuk a fény-optikai mikroszkóppal.

Kontroll I. Normális patkány bőr.

Ha szeretné látni a különbséget a mikroszkópos kép normál heg megváltoztatott patkányok bőre és a hegesedés egy bizonyos idő után a transzplantáció után az IPC, képeket és leírásokat kimutatták, hogy azokat minden fázisában a tanulmány.

A bőr normális bőrfelülete 7-9 rétegből áll. Keskeny vastagságú hornyos réteg. A helyeken 6-8 réteg kancsalákból áll. A bazális réteget hengeres alakú, nagy fényű, szabályos magok és több nukleolus sejtek képviselik. A sejtek és a bazális membrán közötti desmosomális kapcsolatok egyértelműen kifejeződnek. Jól meghatározott bazális membrán amely finom kiemelkedéseket a szubepidermális rétegben párhuzamosak a szelíd kötegek kollagén és elasztin rostok, beleértve hosszúkás fibroblasztok, kis hajók. A mélyebb rétegekben a kollagén és az elasztin szálak kötegei különböző irányokban helyezkednek el. Közöttük sok hajó van ugyanolyan kaliberű vékony falakkal, cellás elemekkel (fibroblasztok, hízósejtek, leukociták). Számos szőrtüsző, faggyúmirigy.

Vezérlés 2. 2 hónapos patkány szar.

Klinikai kép. A sápadtságú rózsaszín ráncok, hámlással, helyenként a kéreg marad. A terület miatt csökkent az összehúzódás a kollagén rostok és válnak körülbelül 3,0-3,5 cm ^:. A bőrrel való kapcsolat hiánya.

Mikroszkopikus kép. A felhám áll 3-5 sejtréteg, redőzött, képviseli lekerekített bazális sejtek, egy sorban subulate, 1-2 sorok keratohyalin granulátum szemek a felső rétegben, vannak részei intracelluláris ödéma. A szaruhártya réteg heterogén módon válik nagyon vékonyról megvastagodottra. A hegek szövetének összehúzódása (összehúzódása) van. A hajtások a papilláris rétegbe behatolnak, és papillákat határoznak meg. Az epidermisz és a dermis közötti határvonal egyenes. A bazális membrán nem követhető mindenütt. A szubepidermális és mélyebb rétegek alsó részén - vastag, lazított falú hajók, sok elhagyatott, sztázis jelenségekkel. A hajók körül - makrofágok, fibroblasztok csoportja. A makrofágok körülveszik a kapillárisokból kialakuló eritrocitákat és fagocitizálják őket. A felületesebb rétegekben - a kis hajszálerek. Az epidermisz alatt a kollagén rostok lazaek. A bendő mélyebb rétegében - a kollagén rostok durva kötegei között, amelyek között számos fibroblaszt van.

Patkány hegesedése egy hónappal a MPAl patkány patkány keratinociták átültetése után.

Klinikai kép. Hegek rózsaszín, azok terület csökken, különösen átmérőjű, átlagosan 2,5-3 cm ². A haj és a faggyúmirigy hiányzik.

Ezek a mikroszkópos vizsgálata a kapott anyag patkányok transzfer MPAlK MPAlK a film és a szubsztrátum nélkül lényegében azonos. Azonban technikailag munka MPAlK támogatott sokkal nehezebb és munkaigényesebb, mint amikor felnőtt MPAlK a felszínen, így a további vizsgálatot a kérdés a transzplantációs kertainotsitov hegek szoktuk, mint az alapját a termesztés ( „hordozó”) rétegelt gyep.

Mikroszkopikus kép. Az epidermisz megvastagodása 15-20 rétegre esik, melynek szinte a közepére a keratinocyták keskeny, hosszúkás, függőleges alakja és kompakt elrendezése van. A bazális sejtek egyenetlen vonalban vannak elrendezve. A maguk könnyűek, nagyok, kör alakúak, egy vagy két nukleollal, ami magas szintetikus és proliferatív aktivitást jelez. Az epidermisz és a dermis közötti határvonal egyenes. A tüskés réteg jól fejlett, 3-5 formájú kerek formájú kerek formából áll, 2 nukleolus sejt található.

Azonnal alatt alapmembrán - plotnoraspolozhennye vékony kötegek kollagén rostok párhuzamosan nagyszámú hajó zapustevshih mélyebb kollagénrostok durvább gyűjtjük szűk kötegek. Számos nagy fibroblasztok, hízósejtek (2-3 látómező), makrofágok, leukociták és zapustevshih hajók, amelynek falai lazítani körülöttük - lazán elrendezett kollagén rostok. Egyes hajókban - stasis, egységes elemek diapedesise. Az erek körül - fibroblasztok, egyetlen limfociták. A bőrrel való kapcsolat hiánya.

Amikor egy keratinocita szuszpenziót átültetnek egy polírozott hegbe, a mikroszkópos kép eltér az előzőtől. A legtöbb állatban - az epidermis vékony, 5-6 réteg sejtből áll. Az alsó réteg szabálytalan, sokszög alakú, lekerekített, szabálytalan alakú magokat tartalmaz. A subepidermális réteg állapota hasonló a transzplantáció nélküli állatok csoportjához.

Ebben az esetben a sejt transzplantációt kísérő folyamatok vagy a szuszpenzió formájában átültetett sejtek nagy veszteségére utalhat. Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a keratinocita transzplantáció során a hegesedés korrekciója szuszpenzió formájában nem megfelelő.

A patkány patkány általi hegesedése 2 hónappal a MPAl patkány patkány keratinociták transzplantációját követően.

Klinikai kép. A heg vékony, gyengéd. A helyeken van egy ecdízis, mérleg.

Mikroszkopikus képek. A stratum corneum megvastagodott, helyenként - hyperkeratosis. Az epidermisz vastagodott, 12-20 sornyi sejtből áll. Az epidermisz és a dermis közötti határvonal egyenes. A finom kollagén szálak az epidermisz alatt nagyon szorosan fekszenek. A bendő mélyebb rétegeiben durva nagy kötegekben gyűlik össze. A szubepidermális rétegben új edényképződik. A hegszövet alsó rétegeiben - sok üres edény, amely az epidermisz felszínével párhuzamosan helyezkedik el. A nagyméretű fibroblasztok egyenletesen oszlanak el a bendő vastagságában, óriási, sokrétű, sok makrofág van.

A patkány patkányait 5 hónappal a patkány spermociták MP átültetése után hegesedik.

Klinikai kép. Scar néz sima, egyenletes, hámozás nélkül, vannak hajszál való nagyobb sűrűségű a periférián a heg, ami azt jelzi, a szélén benőtt szőrtüszők bendőjében és daganata a hajhagymákat. A hegek területe tovább csökken.

Mikroszkopikus kép. Az epidermisz még mindig vastag (15-20 réteg, néha 30-ig) a felső rétegekben keratogialin szemek töltik fel. A bazális membrán jól látható. A kollagén rostjai alatt fekszik. Az alsó rétegekben - a kollagén erősebb és szorosan tele van. A kollagén gerendái között számos kapilláris található. A felső rétegekben az üres hajók száma csökkent. Az epidermisz és a dermis kissé hullámos. A hegszövetekben mély epidermális kitágulatok vannak. A kollagénszálak között újonnan kialakult edények láthatóak. Egyszálú szőrtüszők és faggyúmirigyek látszanak.

Patkányeltérés 9 hónap elteltével az IPA patkány patkány epidermocitáinak átültetése után.

Klinikai kép. Scars sokkal kisebb, mint a korábbi időszakokban, és a kérdéses területet átlagosan mintegy 1,5-2,0 cm ². A hegek egyenetlenül vékony hajúak, különösen a periférián. Kisebb aprólemez-méretezés megmarad.

Mikroszkopikus kép.

Az epidermisz vékonyabbá vált, 6-8 sornyi sejtből állt, a patkányok normális bőrének epidermális szerkezetére emlékeztetve, csak a sejtek sűrűségét 1 mm-rel. Magasabbak és kisebbek. A bázis réteg kis hengeres, hengeres alakú cellából áll. A bazális membrán jól meghatározott, a hemidmoszómák jól láthatóak. Megjegyezzük, hogy a szubepidermális rétegben epidermális kitágulások vannak jelen. A papilláris réteget a heg teljes hosszában fejezzük ki. Ezek a tények azt mutatják, hogy ebben az időszakban az átültetett keratinociták tapadása sokkal tartósabbá vált a bendő mögöttes szöveteivel szemben. Következésképpen, a MALC-transzplantációval rendelkező emberek hegek kezelése 9 hónappal az IPC transzplantáció után hagyományos lehet. Az epidermisz alatt sokkal finomabb kollagénszálak, mint a mély rétegekben. Számos hajó volt, különösen felületesen. A nagyobb edényekben a falak megvastagodnak. A hajhagymákat és a faggyúmirigyeket nagy mennyiségben. A mikroszkópos minta hasonlít egy dermális szövetre.

A kísérleti munka eredményei és vitájuk.

A munka során a mesterséges bőrt hegek patkányok műtét után dermabrázió, átültetett keratinociták különböző formah- sebgyógyulásra felületeken, mint egy szuszpenzió gyolcsból és réteges képződése nélkül szubsztrát. A munkát morfológiai adatok megszerzésére végezték az átültetett allogén keratinociták hegeken való hatására, valamint az optimális transzplantációs variánsok meghatározására.

Azt találták, hogy a transzplantáció mindhárom módja valódi, de az IPAA szubsztrát nélküli transzplantációja nagyon nehézkes eljárás, amely során az IPAC megsérülhet, ami befolyásolja az átültetés eredményeit. Ezenkívül ez a transzplantációs módszer kizárja a munkát nagy felületeken.

Transzplantáció keratinocita szuszpenziót - jelentősen gazdaságosabb módszer nem igényel hosszú sejtek tenyésztése és egyszerű a jelen kiviteli alakban, a kapcsolattartó steril gyolcsból előformák, a méretei, amelyek megfelelnek az értéke hegesedés. Hátralék terápiás hatást kiültetés sejtszuszpenzióhoz körülbelül egy hónap, míg az IPC a sebkötöző - nem jelentős pillanat, amikor a kezelés időtartama eléri a több hónapja. Ismeretes, hogy az IPC átültetése során a betegek égetésekor a bőrszerkezet állapotának átalakulása fokozatosan és több évig alakult ki. A keratinocita tenyészet transzplantációja a sebfelületeken a legmegfelelőbb és legígéretesebb módszer, azonban sokkal drágább is. Ezenkívül ma is igénylik a kifinomultabb bevonatokat, amelyeknek műanyagnak, higroszkóposnak, bakteriosztatikus vagy baktericid tulajdonságúaknak kell lenniük, és biológiailag semlegeseknek kell lenniük a sejtek számára. A film „Polipor” - köztes változata a hazai film sebkötözőszer ellenére néhány hiányosságot, lehetővé tette számunkra, hogy tanulmányozza kísérletileg keratinocyte transzplantáció patkányok hegek és következtetéseket levonni a hatékonyságát ebben az irányban látnivaló hegesedést.

Szerzők, akik végre a transzplantáció az IPC sebeket égetett, megjegyezte, hogy az első héten a transzplantáció után a többrétegű tartály keratinociákban seb megtisztítva a hámréteg megvastagszik, rétegzett. Az epidermis összes rétegét jól definiáltuk. Érdekes, hogy a transzplantátumokban a sejtrétegek száma 10-30% -kal nagyobb, mint a bőr biopsziás mintákban. A szerzők a keratogialin granulátumának megjelenését az MPA transzplantációját követő 5. Napon, a bazális membránon és a hemidesmosómákon már a harmadik napon jelentették meg.

J.Rives mtsai .. (l994), Paramonov BA (1996); NM Kuznyecov és mtsai. (1998) azt találták, hogy a korai időszakokban a transzplantációt követő BMD betegeknél polnosloynymi héjhibák égés utáni, közötti kommunikáció a bőrben és az epidermisz nagyon gyenge, és egy egyenes vonal, papilláris réteg hiányzik. A végén a 2. Hónapban kezdődik a kialakulását sekély papillákkal és a bőr függelékei, a kommunikáció és a bőrben epidermisz erősebbé válik. Irodalmi adatok govoryato transzplantációs allogén keratinocitákat sebért égett betegek ígéretes módszert. Annak ellenére, hogy az allogén keratinocitákat előfordul által benyújtott különböző szerzők az időszak 10 nap, 3 hónap, azonban szerepe van a gyógyulás a seb felületén, felszabadító növekedési faktorok és mechanikusan lezáró hiba. Úgy véljük, hogy MPAlK csökkent antigén aktivitás, amikor in vitro tenyésztett elveszíti Langerhans-sejtek, amely lehetővé teszi számukra, hogy létezik sokáig a szervezetben a címzett. Ezen túlmenően, az allogén kultúra származik a bőr egészséges, fiatal emberek sokkal nagyobb biológiai potenciál az autológ kultúra betegekben trauma után.

A fő célja az volt, hogy meghatározza, hogy gyökeret az allogén keratinocitákat hegek, és mi lesz a változás a hegszövet hatása alatt ilyen biológiailag aktív „sebkötöző”. Pozitív eredmény esetén dolgozzon ki a leghatékonyabb és legkevésbé munkaigényes technológiát a rehabilitációs orvoslás ezen területén.

Adatok sokféleképpen kaptunk hasonlóak voltak a szakirodalomban a morfológiai változások következnek be az emberi epidermisz transzplantáció utáni allogén keratinociták égési sebek. De jelentős eltérések vannak mind a morfológiai szubsztrát, mind az átültetett és a technológia szempontjából. Szóval a kialakulását a bazális membrán és dermális-epidermális kötések (poludesmosom, papilla) fordul elő egy későbbi időben, összehasonlítva átadása keratinociták a sérült felületeket hegesedés nélkül. Ez úgy tűnik, hogy a bendőszövetek rossz tápláléka a dermisz vagy az izomfájdalomhoz képest. A heg, különösen a régi, sűrű kötőszövet nagyon kis számú vénával, az égési sérülés alja egy véredényben gazdag granulációs szövet. Nyilvánvaló tehát, hogy a keratinociták átültetése és felépülése teljesen eltérő. Minél jobban vascularizálták a sejtek átültetésének területét, annál könnyebb feldolgozni őket. Ebből a posztulátumból levonható az a következtetés, hogy fiatalabb hegekkel dolgoznak, ahol a kötőszövet még mindig eléggé laza és gazdag az erekben.

Ennek a kísérleti munkának köszönhetően bebizonyosodott, hogy:

1. A MALK átültetése a hegekre lehetséges. 
2. Az átültetés optimális módja a keratinociták transzplantációja a sebborítóra.
3. A heg felszínét operatív dermabrázióval kell őrölni Schumann lézerrel vagy vágóval.
4. Az MPALK hatása alatt a bendő földfelszínének gyors felszívódása következik be.
5. A jobb vascularis hegszövet, vagyis annál fiatalabb a heg, annál jobb a keratinocita transzplantáció eredménye.
6. A beültetett keratinocyták hatása alatt a hegszövet fokozatosan átalakul és dermális-szerűvé válik (a bőrön kívüli hegesedésű hegszövet).
7. A hegszövet fokozatos fellazulása a szubepidermális réteggel kezdődik. Javítja vaszkularizációját, a kollagén szálak kötegei a bendő felső és alsó részeiben sokkal torzabb helyet foglalnak el, mint a hegek szöveteiben a sejtek átültetése nélkül. Vannak szőrtüszők és faggyúmirigyek. Az epidermisz szerkezetében a hypertrophia fázisa után közelít a normális bőr epidermiséhez.
8. A megfigyelt változások kapcsolatban vannak a keratinociták szekretált növekedési faktorok, citokinek, hogy javítja tropizmusa hegszövet hozzájárulnak annak átalakulás egy merev rostos szövet egy lazább, amely javulásához vezet a heg.

Így az E tanulmány alapján arra lehet következtetni, jótékony hatással van a keratinocitákra átültetett heg, ami lehet praktikus a rehabilitációs betegek különböző hegek.

Ez a patkányokon végzett munka lehetővé tette a követelmények megfogalmazását is. A sebfelületekhez, amelyeken keratinocyták termesztik.

A sérüléseknek:

• biokompatibilis sejtekkel,
• lélegző,
• rugalmas, formázó bázis,
• legyen hidrofil,
• mivel a gyógyászati adalékok antibakteriális gyógyszereket tartalmaznak, és az antioxidánsok nem toxikusak a tenyésztett sejteken.

A hegek biotechnológiai kezelésének klinikai eredményei.

Korábban N. Carver és mtsai. (1993) megállapította, hogy a okkluzív kötszerek legjobb elősegíti kötődés a sebet, és a túlélés a keratinociták, de nem teszik lehetővé, hogy alkotnak rétegzett (érett) epidermisz. Rétegzett epidermisz kialakításához légkörnyezet szükséges. Ezért a többrétegű réteg felhelyezése után egy 7-10. Nap után eltömődéses sebfelületet javasoltak, hogy eltávolítsák és a sebeket száraz kötések vagy vízoldható kenőcsök alatt végezzék. Azt mondhatjuk, hogy a "szubsztrát" minősége és tulajdonságai, amelyeken a sejteket termesztik, nagyon fontosak a sejtanyag transzplantációjának hatékonyságához, következésképpen az orvosok munkájának eredményeihez. De az ideális sebkötöző számára ma már nem, annak ellenére, hogy a bőség a javasolt lehetőségek (műbőr, nem szőtt karboximetil-cellulózt, fibrin bevonatok, féligáteresztő poliuretán film). Nem lényeges pillanat ebben a kérdésben a "szubsztrátumok" (speciális sebfelületek) költsége, mivel magas költsége növeli a biotechnológiai kezelés teljes költségét.

A sejttechnológiák hatékonysága eddig bizonyított, de sajnos ezek a technológiák nagyon drágák, különösen azokban az országokban, ahol a sejtkészítmények ipari gyártását nem állapították meg. Mindazonáltal olyan országok, mint az Egyesült Államok, már régóta létrehoznak egy iparágat az égetett transzplantációra szolgáló cellás anyagok előállításához. Különösen a cég BioSurface Technology Inc, 1989 óta emelt 37.000 laminált réteg keratinocyták, ami már használt kezelésére 240 betegnél 79 országban szerte a világon (R.Odessey, 1992) 1 cm ² sejttenyészet költségek 7-8 $ US.

A különböző betegségek és bőrproblémák kezelésének technológiája számos különbséggel bír, de a sejtek kezelésének lényege a minőségi sejtanyag előállítása és transzplantációja.

Ez a folyamat a következő lépésekből áll:

• az érintett (vagy donorok) bőrének kiválasztása,
• bőrszárnyak szállítása a biotechnológiai központba,
• a bazális réteg sejtjeinek izolálását és azok szorzását,
• a keratinocyták többrétegű rétegeinek felépítése (IPC).
• sejtkultúrák transzplantációja.

A többrétegű keratinocita rétegek transzplantációjának kezelésében a fő probléma az életképes sejtek szükségessége a sejt transzplantáció minden szakaszában. Bőrdarabokat kiemelni az autológ vagy allogén sejtek legyen olyan vékony, mint a jelen esetben, azok könnyebb megosztani, mechanikai és enzimatikus módszerek és megkapjuk a szuszpenzió az élő sejtek növekedését. Ezeket a dermatoma levágásával vagy a szemhéjak bőrével, a fitymával, a váll belső felületével lehet megszerezni. Mivel a sejtek érzékenyek a halogénekre (klór, jód), hidrogén-peroxiddal szemben, nem alkalmazhatók a bőr kezelésére az anyag bevitelének időpontjában.

A sejtszövetek mennyiségi és minőségi hozama és a termesztésük hatékonysága a donor egészségi állapotától és életkorától is függ. Ezenkívül a bőr biopsziás mintákat a lehető leghamarabb és a megfelelő körülmények között (környezet, hőmérséklet) a laboratóriumba kell szállítani egy tanúsított és akkreditált laboratóriumba.

A tárolás és szállítás a bőr-graftok vagy Dulbecco Medium 199, kiegészítve 10% szarvasmarha szérummal, a közeget DMEM, kiegészítve 5% magzati borjúszérummal és antibiotikumokkal.

A citológiai laboratóriumban bőrbiopsziát először mechanikusan szét kis darabokra, majd ezt követően a dermális darab enzimek segítségével: tripszin, kollagenáz, diszpáz, és mások.

Az enzimek hatására dezmoszómákkal történő pusztulás történik, és a keratinociták különféle sejtekből vagy aggregátumokból állnak, amelyek különböző cellákból állnak. A tenyésztéshez csak olyan bazális keratinocitákat alkalmaznak, amelyeket különleges táptalajon tenyésztenek 5% CO tartalmú inkubátorokban. Petri-csészékben vagy injekciós üvegekben, t = 37 ° C-on. 48 órán belül megfigyelik a keratinocita kolóniák képződését, amelyek fokozatosan egyrétegűvé konvergálnak. Miután elegendő számú sejtet kaptunk, a kapott szuszpenziót az erre a célra előkészített és Petri-csészékbe helyezett sebtömlőre terítjük. A szuszpenzióból először egyrétegű, majd egy többrétegű keratinocitát képződnek. A keratinocita-tenyésztési eljárás szakaszaiban szaggatottan a 3. ábrán látható. 12 (33,43,54,65).

A transzplantációra alkalmas többrétegű keratinocita képződés általában 7-10 napig tart. Néha ez az időszak hosszabb, ami a forrásanyag minőségétől (életkor, donor egészségi állapotától, az anyag helyességétől, a használt média minőségétől stb.) Függ. Ha a többrétegű réteg felborul, akkor a felszínén olyan sejtek lehetnek, amelyekben az átültetésre nem alkalmas apoptózis jelenségek vannak. Petri-csészékben, termesztett velük seb réteg többrétegű bevonatokat keratinociták (IPC) szállítjuk a klinikára a speciális konténerek hőmérsékleten nem alacsonyabb, mint + 15 ° C-on

A módosított Green módszer az IPC termesztésére

Munkavégzésünk során mint egy réteges bevonatot használtunk egy többrétegű kamrákkal, elhagyva azokat a polipor filmeket, amelyekkel patkányokon végzett kísérletezéssel kezdtünk dolgozni. Így a többrétegű keratinocita rétegeket előtermékenyítéssel és steril batistával növesztjük, bár ez nem az optimális sebfelület.

Klinikai vizsgálatokat végeztek az önkénteseken a szükséges etikai normák betartásával: egy szerződés aláírásával és egy tájékozott beleegyezéssel.

1. A saját (autológ) kultúrát és a bank sejtekből (allogén) keratinocitákból vett kultúrát alkalmaztuk.
2. A saját keratinocitákat a páciens vállának belsejéből kivágott bőrdarabból nyertük.
3. A hegek dermabrázióját hőcsatlakozással, rotációs lemezekkel és erbium lézer segítségével végeztük.
4. Normotróf, hypotrophiás és hipertrófiás hegekkel rendelkező betegcsoportokat vettek.

A celluláris technológia alkalmazásának technológiai folyamata a bőrhegyek típusának javítására a következő lépésekből állt:

1. A betegek kiválasztása.
2. Ismertesse a kezelés lényegét, a várt eredmények megszerzésének ütemezését, a szerződés aláírását és a beleegyezést.
3. A betegek kijelölése 2-3 héttel a műtét előtti selmevitnél 1 t-val. Naponta 3-szor, zürtökös 1t. Naponta 3 alkalommal.
4. Figyelembe egy darab bőr 2,0 cm hosszú és 0,7-1,0 cm széles a belső felületén a váll, magas, közel alján hónalji terület autológ keratinociták.
5. Abban az esetben, ha a betegek megtagadják saját keratinociták izolálását, mivel a váll belső felszínén lineáris heg keletkezik, a sejtanyagot egy sejtpárból vették (allogén keratinociták).
6. A keratinocitákat izolálták és laboratóriumi körülmények között termesztették az ilyen típusú munkákhoz.
7. Miután megkapták az átültetésre elegendő IPC-t, a műtét napját a klinikán lévő hegekbe adták, ahol az anyagot speciális tartályokban hozták Petri-csészékbe.
8. Dermabrázió végrehajtott művelet bendőben hemosztázist talajfelszín mossuk steril sóoldattal mossuk, szárítjuk, majd ez átültetett steril IPC gyolcsból „sejtek le.” Vagyis a MIC-ben felsőbb sejtek a polírozott felület mellett voltak alacsonyabbak.
9. A tetejére egy steril fóliát helyeztek el, amelyet rugalmas kötéssel vagy Omnifix elasztikus sávszalaggal rögzítettek a bőrön. A film helyett szilikont, például Mepitel, Mepiform, szilikon géllemezeket tartalmazó közömbös sebfelületeket is lehet használni.

5-7 nap elteltével eltávolítjuk a filmet vagy a szilikon bevonatot. Ettől az időtől kezdve minden keratinocitának be kell csúsznia a polírozott hegbe, és hozzá kell kötnie a felületéhez.

10. A film és a szilikon bevonat által létrehozott nedves környezet aktívan hozzájárul ehhez. A hegtől ezen a ponton maradt baptista impregnálható kurióz vagy kitozán gél segítségével. Ennek eredményeképpen a 2. Napon sűrű kéreg keletkezik, ami a páciens kényelmét szolgálja, ha rugalmas, légáteresztő gipszet, például Omnifixet kell kijavítani. A lélegző kéreg lehetővé teszi az újonnan kialakult bőrfelület megkülönböztetését és érettségessé válását.

A hegek típusától és az őrlési mélységtől függően 8-10 nap elteltével el kell utasítani a kötést. Az epidermisz 30-40% -kal több sejtréteggel rendelkezik, mint a normál bőrben. A bazális membrán nem képződik. A sűrített epidermisz keratinocitái felszabadítják a biológiailag aktív molekulák tömegét a hegszövetbe.

A hegek biotechnológiai kezelésének sikere nagymértékben attól függ, hogy milyen módon kezelik őket a posztoperatív időszakban. A sejttenyészetek "gyengéd" típusú sebtömlőnek és a transzplantáció utáni korai időszakokban a BMD könnyen leválasztható az alatta lévő szövetekből. Ezért a betegeket javasolják, hogy a műtét után gondoskodjanak a hegről. Belül 8-9 hónap, és ne dörzsölje könnyű kezelni a hideg forralt vizet, hogy ne stripping vékony, az újonnan létrehozott epidermisz, amely egy sűrű tapad az alatta lévő szövetek.

Megjegyzés.

A műtét előtt és alatt dermabrázió használata halogénezett oxidánsok és tartósítószerek (yodopiron, sulyodopiron, iodinol, yodinat, klórhexidin, a hidrogén-peroxid) megengedett a kiültetés előtt kletok- abszolút miatt ellenjavallt citotoxikus hatásukat. A sejtekre mérgező anyagok szintén metilénkék. Ragyogó zöld.

A fertőzés elkerülése érdekében, különösen akkor, ha a hypertrophiás hegekkel dolgozik, lehetőség van a neomicin-szulfát, a polimixin vagy a gentamicin kezelésére. Nem okoznak citotoxikus hatást a keratinocitákra.

Ennek a kezelésnek köszönhetően háromszoros hatás érhető el.

1. A bendő felületének összehangolása.
2. Hozzon létre egy réteget fölötte egy új epidermisz, normál vastagság.
3. Átalakítása hegszövet dermopodobnuyu hatására citokinek, növekedési faktorok és más bioaktív molekulák által szekretált átültetett sejtek és keratinociták által stimulált őket, fibroblasztok és makrofágok.

A heg kevésbé észrevehető, rugalmasabbá válik, a pórusok megjelenik benne, puff haj, a pigmentáció visszaállítható a melanocyták jelenléte miatt az MPC-ben.

Mindazonáltal a cicatrixban mindezek a pozitív pillanatok nem érkeznek azonnal. Ebben a tekintetben szükséges figyelmeztetni a betegeket. Hogy a hegek szöveteinek a dermisbe való átalakulása lassú, és az ilyen kezelés optimális eredményei legfeljebb 10-14 hónapig várhatók. Közvetlenül az öltözködés visszautasítása után a polírozott felületek nagysága polikróm, minél fényesebb a köszörülés. A bőr legkisebb károsodása akkor következik be, amikor a normotróf hegeket erbium lézerrel csiszolják. A hegek és a környező bőr színe helyreállt 3 és 8 hét között. Az ilyen óvintézkedések ellenére néha posztoperatív hiperpigmentációról van szó, amely több hónapig függetlenül folytatható.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]