In situ hibridizáció: sejtek citogenetikai diagnosztikája

Az in situ nukleinsav-hibridizáció (ISN) egy laboratóriumi technika, amelynek során egy jelölt próba közvetlenül a kromoszómákban, sejtekben vagy szövetmetszetekben lévő komplementer dezoxiribonukleinsav (DNS) vagy ribonukleinsav (RNS) szekvenciához kötődik. Ez lehetővé teszi az orvos és a laboratórium számára, hogy meghatározza, hogy a kívánt szekvencia jelen van-e, hol található, hány példányban van, és hogy van-e kromoszóma-átrendeződés. [1]

A modern orvostudományban ez a megközelítés nem azért fontos, mert mindent keres, hanem azért, mert nagyon pontosan képes választ adni egy adott klinikai kérdésre. Ha az orvos számára érdekes gén, kromoszóma régió vagy átrendeződés ismert, a módszer lehetővé teszi az adott célpont gyors és egyértelmű vizsgálatát. Ez különösen hasznossá teszi a citogenetikában, a patomorfológiában és az onkológiában. [2]

A klinikai gyakorlatban a módszer fluoreszcens változatát alkalmazzák leggyakrabban. Fluoreszcensen jelölt próbákat használ, és az eredményeket speciális mikroszkóp alatt értékelik ki. Az Egyesült Államok Nemzeti Rákkutató Intézete hangsúlyozza, hogy ez a megközelítés lehetővé teszi a gének kromoszómán elfoglalt helyének, kópiaszámának és számos kromoszóma-rendellenességnek a meghatározását, valamint segíti a betegségek diagnosztizálását és a kezelés megtervezését. [3]

Ez a módszer nem helyettesíti a hagyományos kariotípus-meghatározást, a microarray-analízist vagy a szekvenálást. Más logika alapján működik. A kariotípus áttekintést nyújt a teljes kromoszómális tájképről, a microarray-analízis nagy felbontásban keresi a veszteségeket és a duplikációkat a teljes genomban, a szekvenálás a génszekvenciák változásait keresi, a nukleinsav-hibridizáció pedig közvetlenül a sejtekben és szövetekben válaszol meg egy adott kérdést egy adott célponttal kapcsolatban. [4]

Éppen ezért ennek a módszernek a megfelelő helye ma nem „univerzális genetikai elemzésként”, hanem a diagnózis, a prognózis és a kezelés finomítására szolgáló célzott eszközként van. Különösen értékes, ha gyorsan meg kell határozni a génmásolatok számát, az amplifikációt, a deléciót, a transzlokációt, a mozaicizmust, vagy egy genetikai lelet specifikus tumorsejtekkel vagy szövetekkel való kapcsolatát. [5]

1. táblázat. Mit mutat meg a módszer, és mit nem helyettesít

Kérdés	Rövid válasz
Mit keres a módszer?	A dezoxiribonukleinsav vagy ribonukleinsav komplementer szekvenciái kromoszómákban, sejtekben és szövetekben
Mit látsz?	Lelőhely megléte, lelőhely hiánya, másolatok száma, lokalizáció, rekonstrukciók része
Alkalmas címkeresésre?	Igen
A kariotípus helyettesíti-e	Nem
A mikroarray analízis helyettesíti-e	Nem
A szekvenálás helyettesíti-e	Nem
Ahol különösen hasznos	Citogenetika, onkológia, patomorfológia, egyéni prenatális forgatókönyvek

Asztallap. [6]

Hogyan működik a módszer

A módszer a nukleinsavak természetes képességén alapul, hogy komplementer szekvenciákhoz kötődnek. A laboratórium létrehoz egy rövid próbát, amely megfelel a genom kívánt régiójának vagy a kívánt ribonukleinsavnak, megjelöli azt, és sejt- vagy szövetmintára alkalmazza. Ha a kívánt célpont jelen van, a próba hozzákötődik, és mikroszkóp alatt láthatóvá válik. [7]

A fluoreszcens variáns fluoreszcensen jelölt próbákat használ. A Nemzeti Egészségügyi Szolgálat (NIS) egy tipikus munkafolyamatot a következőképpen ír le: először a próbát választják ki az adott régióhoz, majd a gyógyszert és a próbát denaturálják, ezt követően alacsonyabb hőmérsékleten hibridizáció történik, a nem specifikusan kötött anyagot eltávolítják, és a fluoreszcens jeleket mikroszkóp alatt értékelik. [8]

A vizsgálat két fő módon végezhető el. Az első a metafázis, amely az osztódó sejtek kromoszómáit vizsgálja. A második az interfázis, amely a sejtmagokat elemzi anélkül, hogy a teljes metafázisra kellene várni. Ez különösen hasznos tumorminták és fixált anyagok esetében, ahol a sejtnövekedés nehéz vagy lehetetlen. [9]

A metafázisos variáns pozicionális információt szolgáltat. Segít megérteni a jel pontos helyét a kromoszómán, ezért hasznos a transzlokációk, inverziók és komplex átrendeződések tisztázásában. Az interfázisos variáns gyorsabb és kényelmesebb a rutin diagnosztikában, de szinte semmilyen térbeli információt nem nyújt, kivéve a tumorokban lévő fúziók keresésére kifejlesztett speciális sémákat. [10]

A módszer további előnye, hogy több, eltérően festett próba egyidejű használata is lehetséges. Ez lehetővé teszi több régió egyidejű értékelését egyetlen készítményben, például egy adott gén kópiaszámának összehasonlítását egy kromoszómális kontroll régióval, vagy átrendeződési partnerek egyidejű keresését. Az egyidejűleg használható próbák száma azonban korlátozott, ezért a módszer inkább célzott, mint általános. [11]

2. táblázat. A tanulmány főbb szakaszai

Színpad	Mi történik?
Vizsgálófej kiválasztása	Egy próbát választanak ki egy adott génhez vagy kromoszóma régióhoz
A gyógyszer elkészítése	Vérsejteket, csontvelőt, szövetet vagy daganatokat használnak
Denaturáció	A nukleinsavak különálló kettős szálai
Hibridizáció	A próba egy komplementer célponthoz kötődik
Mosás	Eltávolítja a nem kötött és nem specifikusan kötött anyagokat
Mikroszkópia	Jelek és számuk értékelése
Értelmezés	Hasonlítsa össze a képet a klinikai kérdéssel

Asztallap. [12]

Amikor valóban szükség van a kutatásra

Manapság erre a módszerre elsősorban akkor van szükség, ha a klinikai probléma már eleve meglehetősen specifikus. Ha egy orvos specifikus kromoszóma-átrendeződésre, génamplifikációra, egy régió elvesztésére, mozaicizmusra gyanakszik, vagy egy másik vizsgálat egy nem egyértelmű leletét szeretné tisztázni, a célzott módszer nagyon hasznosnak bizonyul. Ez egyben az erőssége és a korlátja is. [13]

Az alkotmányos citogenetikában, azaz veleszületett kromoszóma-rendellenességek keresése során a módszert strukturális és mozaikos variánsok, kiegyensúlyozott transzlokációk és a kiegyensúlyozatlan átrendeződések természetének tisztázására használják. Az angliai Nemzeti Egészségügyi Szolgálat (National Health Service) külön kiemeli a módszer szerepét a microarray-elemzés és a kariotípus-vizsgálat eredményeinek tisztázásában, amikor egy duplikáció helyzetének, egy marker kromoszóma eredetének megértéséhez vagy a mozaicizmus megerősítéséhez szükséges. [14]

A prenatális diagnosztikában a módszer továbbra is megőrzi értékét, de már nem univerzális első tesztként. Az Amerikai Szülészeti és Nőgyógyászati Kollégium megjegyzi, hogy az interfázisos fluoreszcens nukleáris hibridizáció segítségével gyorsan kimutathatók a gyakori aneuploidiák, különösen a 13-as, 18-as és 21-es triszómiák, valamint a nemi kromoszóma-rendellenességek, amikor gyors előzetes válaszra van szükség. Ugyanakkor a modern egészségügyi rendszerek egyre inkább a kvantitatív fluoreszcens polimeráz láncreakciót használják erre a célra, mint standardabb, gyors első tesztet. [15]

A gyermekgyógyászatban és a fejlődési késés esetén ez a módszer már nem minden esetben az első lépés. Az Amerikai Gyermekgyógyászati Akadémia szerint a globális fejlődési késéssel vagy értelmi fogyatékossággal élő gyermekek esetében az első vonalbeli beavatkozás jellemzően a microarray-elemzést és az exomszekvenálást foglalja magában, a célzott hibridizáció helyett. Maga a módszer azonban továbbra is értékes marad, ha egy olyan specifikus átrendeződést kell tisztázni, amelyet egy teljes genomú teszt azonosított, de nem lokalizált. [16]

A módszer továbbra is különösen fontos az onkohematológiában. A Nemzeti Vértechnológiai Értékelési Program (NBTAP) szerint alkalmazható multiplex mielóma, mielodiszpláziás szindróma és más hematológiai és nem hematológiai tumorok esetén. Ezekben a helyzetekben a módszer segít azonosítani a génfúziókat, amplifikációkat, deléciókat és a tumorsejtek kis klónjait, amelyek befolyásolhatják a diagnózist, a prognózist és a kezelési döntéseket. [17]

Szilárd tumorok esetében ezt a módszert széles körben alkalmazzák kiegészítő diagnosztikai és prognosztikai eszközként. Az egyik legismertebb példa a HER2 gén kópiaszámának meghatározása emlőrákban. Az Amerikai Patológusok Kollégiuma és az Egyesült Államok Nemzeti Rákkutató Intézete szerint ez a fajta vizsgálat segít azonosítani a génamplifikációt, és befolyásolja a későbbi gyógyszeres terápiát. Hasonló logikát alkalmaznak számos más tumor esetében is, ahol specifikus átrendeződések vagy amplifikációk fontosak. [18]

3. táblázat. Fő klinikai helyzetek

Helyzet	A módszer szerepe napjainkban
Feltételezett kiegyensúlyozott transzlokáció	Magas
Egy rejtélyes mikroarray-megállapítás tisztázása	Magas
Mozaikosság gyanúja	Magas
A gyakori magzati aneuploidiák gyors kimutatása	Lehetséges, de nem mindig az első választás
Fejlődési késéssel küzdő gyermek, akinek nincs meghatározott célja.	Általában nem az első teszt
Myeloma multiplex és más vérképzőszervi daganatok	Nagyon fontos
HER2 amplifikáció értékelése	Nagyon fontos
Krónikus limfocitás leukémia	Fontos a diagnózis és a taktika kiválasztása szempontjából

Asztallap. [19]

Milyen anyagokra van szükség, és hogyan történik az előkészítés?

Nem akármilyen anyag alkalmas a vizsgálathoz, hanem csak az, amely kellően ép sejtmagokat vagy kromoszómákat tartalmaz. A feladattól függően perifériás vért, csontvelőt, keneteket, magzatvízsejteket, korionbolyhokat, szövetmetszeteket és tumoranyagot használnak, beleértve a fixált és a paraffinba ágyazottakat is. A módszer egyik előnye, hogy az interfázisos variánshoz nem mindig szükséges sejtkultúra. [20]

Ha metafázisos analízisre van szükség, a sejteket tenyészteni kell, és az osztódási fázisban kell leállítani, ami meghosszabbítja a folyamatot. Ha interfázisos analízisre van szükség, a készítmény gyorsabban elvégezhető, különösen tumoros anyag esetében. Az Angliai Nemzeti Egészségügyi Szolgálat hangsúlyozza, hogy az interfázisos magokkal és paraffinblokkokkal való munkavégzés lehetősége kényelmessé teszi a módszert a patológia és az onkológia számára. [21]

A beteg előkészítése nem annyira magától a módszertől, mint inkább a mintavétel módjától függ. Perifériás vérvétel esetén általában nincs szükség speciális, összetett előkészítésre. Csontvelő, biopsziák, magzatvíz és korionbolyhok vizsgálatakor a szervezési és klinikai kérdéseket szakorvos, hematológus, onkológus, szülész-nőgyógyász vagy klinikai genetikus határozza meg. [22]

A feldolgozási idő attól függ, hogy szükség van-e sejtnövekedésre. Ha a vizsgálatot előkészített szövetkészítményen vagy interfázisos sejtmagokon végzik, a válasz gyorsabban megérkezhet. Ha metafázisos előkészítésre van szükség, a feldolgozási idő megnő. Ezért sürgős prenatális esetekben vagy onkológiában gyakran a gyors interfázisos opciót választják, ha a klinikai kérdés lehetővé teszi ezt a sémát. [23]

Fontos megérteni, hogy az anyag minősége közvetlenül befolyásolja az eredményeket. A rosszul konzervált szövet, a kis számú tumorsejt, a nem elegendő számú sejtmag, a technikai műtermékek és az értelmezési nehézségek álnegatív vagy határozatlan eredményekhez vezethetnek. Ezért a módszer továbbra is munkaigényes és tapasztalt személyzetet igényel.

4. táblázat. Melyik anyagot használják leggyakrabban?

Anyag	Hol használják leggyakrabban?
Perifériás vér	Alkotmányos citogenetika, mozaikos állapotok része
Csontvelő	Leukémia, mielodiszpláziás szindróma, myeloma multiplex
Paraffin tumorblokkok	Patomorfológia és szilárd daganatok
Magzatvíz	Prenatális diagnózis
Korionbélbolyhok	Korai prenatális diagnózis
Szövetmetszetek	Génamplifikációk és -átrendeződések keresése tumorokban

A táblázat alapja.

Hogyan kell leolvasni az eredményt

Az eredmény értelmezése mindig a használt próba és a laboratóriumnak feltett kérdés megértésével kezdődik. Ugyanez a módszer használható génkópiák számlálására, deléció keresésére, transzlokáció kimutatására vagy amplifikáció bizonyítására. Ezért a klinikai kontextus nélküli válasz szinte soha nem elegendő.

Ha kópiaszám-próbát alkalmaznak, a laboratórium kiértékeli, hogy hány jel látható a sejtmagban vagy a kromoszómában. Ez felhasználható deléciók, duplikációk és amplifikációk kimutatására. A Nemzeti Rákkutató Intézet kifejezetten kijelenti, hogy ez a módszer lehetővé teszi egy gén helyének, a másolatok számának és a kromoszóma-rendellenességeknek a meghatározását.

Ha a cél egy átrendeződés kimutatása, speciális protokollokat alkalmaznak, például próbákat a folytonosságvesztés vagy fúzió kimutatására. Ez különösen fontos az onkohematológiában, mivel egy specifikus átrendeződés jelenléte megváltoztathatja a diagnózist, a prognózist és a terápiával szembeni érzékenységet. A Nemzeti Vérbetegségek Programja hangsúlyozza, hogy ez a módszer képes a neoplasztikus sejtek kis populációinak kimutatására, és továbbra is az arany standard számos tumorátrendeződés citogenetikai kimutatásában.

A patológiában az eredményeket gyakran a morfológiával és az immunhisztokémiával együtt értelmezik. Emlőrákban például egy fehérjemarker negatív, pozitív vagy kétes eredménye hibridizációval történő megerősítést igényelhet a HER2 gén kópiaszámának felméréséhez. Ezért a patológiában ez a módszer nem versenyez az immunhisztokémiával, hanem kiegészíti azt.

A negatív eredmény nem értelmezhető automatikusan genetikai patológia hiányaként. Előfordulhat, hogy a módszer egyszerűen nem vett észre egy, a kiválasztott célponton kívüli változást. Ezért, amikor a klinikai gyanú magas, de a célpont negatív, a következő lépés gyakran a microarray-elemzés, a kariotípus-meghatározás vagy a szekvenálás, a klinikai igényektől függően.

5. táblázat. Mit jelent az eredmény különböző forgatókönyvekben?

Helyzet	Mit jelent általában egy pozitív eredmény?
Génmásolat-szám próba	Génduplikáció vagy amplifikáció
Helyszín nélküli vizsgálat	A régió törlése
Fúziós szonda	Az átszervezés megléte az egyesülés létrejöttével
Szakasztörés-szonda	A megfelelő lókusz valószínűsíthető átrendeződése
Mozaicizmus teszt	2 vagy több sejtpopuláció jelenléte
Daganatvizsgálat	Egy genetikai lelet, amely befolyásolhatja a diagnózist, a prognózist vagy a terápiát

A táblázat alapja.

Miben különbözik ez a módszer a kariotípus-vizsgálattól, a mikroarray-analízistől és a szekvenálástól?

A kariotípus-vizsgálat és a célzott hibridizáció hasonló, de eltérő problémákat old meg. A kariotípus áttekintést nyújt az összes kromoszómáról, és egyértelműen feltárja a főbb átrendeződéseket, míg a célzott hibridizáció csak egy adott célpontra összpontosít. A célzott módszer azonban gyorsabban tud válaszolni egy adott kérdésre, és az interfázisos sejtmagokon működik, így nem mindig igényel teljes körű sejtkultúrát.

A microarray analízishez képest ennek a módszernek jelentős előnye van: pozicionális információt szolgáltat. Az angliai Nemzeti Egészségügyi Szolgálat hangsúlyozza, hogy a microarray analízis nem tárja fel a duplikáció pontos helyét, és nem mutat ki kiegyensúlyozott transzlokációkat és inverziókat, míg a kariotipizálás és a célzott hibridizáció alkalmazható az ilyen megállapítások tisztázására.

De a microarray analízisnek van egy erőssége is: sokkal nagyobb felbontásban vizsgálja a teljes genomot veszteségek és duplikációk után kutatva. Az angol Nemzeti Egészségügyi Szolgálat szerint a microarray analízis 50-200 kilobázis szintű kópiaszám-változásokat képes kimutatni, míg a citogenetikai felmérési módszerek felbontása lényegesen durvább. Ezért fejlődési késések, veleszületett rendellenességek és számos prenatális forgatókönyv esetén a microarray analízis gyakran az első teszt.

A szekvenálás egy még összetettebb problémát old meg. Génszekvenciák változásait keresi, ezért nélkülözhetetlen monogénes betegségek gyanúja esetén. A célzott hibridizáció nem keres ilyen specifikus változásokat. Ezért e módszerek közötti választást nem a „melyik modernebb”, hanem inkább a „melyik rendellenesség valószínűbb egy adott betegnél” elve alapján kell megtenni.

A gyakorlati orvoslásban a módszerek gyakran nem versengenek egymással, hanem láncolatban működnek. Először is, a microarray-elemzés azonosíthat egy hiányt vagy duplikációt, majd a célzott hibridizáció finomítja a lelet helyét. Vagy fordítva: a tumor morfológiája alapján az orvos gyanakodhat egy specifikus átrendeződésre, és azonnal célzott vizsgálatot írhat elő anélkül, hogy időt pazarolna egy átfogó keresésre. A helyes stratégia a klinikai céltól, a sürgősségtől és az anyag elérhetőségétől függ.

6. táblázat. Összehasonlítás más genetikai módszerekkel

Módszer	Mit lát ő a legjobban?	Biztos pont	A fő korlátozás
Kariotípus-vizsgálat	A kromoszómákban bekövetkező főbb számbeli és szerkezeti változások	A teljes kromoszómakép áttekintése	Alacsony felbontás
Célzott hibridizáció sejtekben és szövetekben	Specifikus gén, lókusz, átrendeződés, amplifikáció, deléció	Gyors és célzott válaszadás, bizonyos esetekben pozícióinformációk	Nem felülvizsgálati módszer
Mikroarray elemzés	Genomszintű veszteségek és duplikációk	Nagy felbontás	Nem lát kiegyensúlyozott szerkezetátalakítást, és nem nyilvánít állást a megállapításokról
Exom és genom szekvenálás	Génszekvencia változások	Magas érték monogén betegségekben	Nem helyettesíti a citogenetikai feladatokat

A táblázat alapja.

A módszer korlátai és mit kell tenni az eredmény után

Ennek a módszernek a fő korlátja a célzott jellege. Akkor hatékony, ha tudjuk, mit kell keresni. Ha a cél túl általánosan megfogalmazott, például "a teljes genom szűrése minden lehetséges rendellenességre", a célzott hibridizáció eleve hiányos lesz, és gyengébb a kérdőíves módszereknél.

A második korlátozás az, hogy egyszerre csak korlátozott számú próba és szín használható. Az angol Nemzeti Egészségügyi Szolgálat rámutat, hogy ez egy célzott teszt, és nem képes egyszerre nagyszámú régiót olyan széles körben elemezni, mint a microarray elemzés. Ez egyszerű következtetésre vezet: az egyik próba negatív eredménye nem zárja ki a genom egy másik régiójában lévő problémát.

A harmadik korlátozás az értelmezéssel kapcsolatos. Ez a módszer tapasztalt szakembereket igényel, mivel a jelértékelés összetett lehet, beleértve az anyagminőséget, a nukleáris átfedést, a háttérfluoreszcenciát, a tumor heterogenitását, az atípusos sejtek alacsony arányát és a technikai műtermékeket. Emiatt az eredményeket mindig a klinikai adatokkal, a morfológiával és egyéb vizsgálati eredményekkel együtt kell értelmezni.

Pozitív eredmény után a következő lépés a klinikai területtől függ. Az onkológiában ez a megállapítás gyakran befolyásolja a prognózist és a kezelés megválasztását. Veleszületett és reproduktív problémák esetén az eredményhez genetikai tanácsadásra lehet szükség a család számára, tisztázó kariotípus-vizsgálatra vagy microarray-elemzésre. Prenatális diagnózis esetén az előzetes gyors eredmény nem mindig teszi szükségtelenné a teljes körű megerősítő vizsgálatot.

Negatív eredmény után gyakran nem szabad automatikusan ellazulni, hanem fel kell tenni a megfelelő következő kérdést. Ha a célzott teszt nem igazolódik, de a klinikai kép továbbra is meggyőző, átfogóbb megközelítést alkalmaznak. Pontosan így működik a modern genetikai diagnosztika: nem egyetlen teszt minden helyzetre, hanem az optimális eszköz következetes kiválasztása egy adott problémára.

Gyakran ismételt kérdések

Mi is ez az elemzés egyszerűen fogalmazva?
Ez egy olyan módszer, amely a dezoxiribonukleinsav vagy ribonukleinsav egy adott régióját keresi közvetlenül a sejtekben, szövetekben vagy kromoszómákban. Feltárja, hogy a kívánt célpont jelen van-e, hol található, és hány példányban van jelen.

Ez a teszt minden genetikai betegségre vonatkozik?
Nem. Ez egy célzott, nem átfogó módszer. Nem helyettesíti a mikroarray-elemzést, a kariotípus-meghatározást vagy a szekvenálást.

Hogyan hasznos ez a módszer az onkológiában?
Segít azonosítani a génátrendeződéseket, amplifikációkat és deléciókat, ami finomíthatja a diagnózist, a prognózist és a kezelési stratégiát. Ez különösen fontos az onkohematológiában és egyes szilárd tumorok esetében.

Elvégezhető a vizsgálat paraffinba ágyazott tumorblokkon?
Igen. Az interfázisos módszer fixált paraffinba ágyazott anyagon is elvégezhető, ezért a módszert széles körben alkalmazzák a patológiában.

Szükséges-e mindig sejtkultúra?
Nem. A metafázisos variánshoz szükséges, de az interfázisos variánshoz nem mindig. Ez a módszer egyik fő gyakorlati előnye.

Miért nem ez a módszer mindig az elsődleges választás a gyermekek fejlődési késedelmeinek diagnosztizálására?
Mert ilyen esetekben gyakran genomszintű keresésre van szükség a veszteségek és duplikációk, vagy a génváltozások felderítésére. Ezért a microarray analízis és az exom szekvenálás általában az elemzés elsődleges vonala.

Alkalmazható ez a módszer terhesség alatt?
Igen. Gyorsan képes kimutatni a gyakori aneuploidiákat specifikus kromoszómákban, de a modern gyakorlatban nem mindig ez az első gyorsteszt. A mikrochip-analízis nagy jelentőséggel bír a magzati szerkezeti rendellenességek kimutatásában.

Teljesen kizárja a negatív eredmény a genetikai problémát?
Nem. Ez csak azt jelenti, hogy a kiválasztott célpontot nem észlelték vagy nem erősítették meg. A probléma a genom egy másik régiójában helyezkedhet el, vagy más molekuláris mechanizmusa lehet.

Miben különbözik ez a módszer a microarray analízistől?
A microarray analízis nagy felbontásban keresi a veszteségeket és duplikációkat a teljes genomban, míg a célzott hibridizáció egy előre kiválasztott célponttal kapcsolatos konkrét kérdésre válaszol, és pozicionális információkat is szolgáltathat.

Mikor különösen értékes ez a módszer?
Amikor az orvos már pontosan tudja, hogy mit akar vizsgálni: egy adott transzlokációt, génamplifikációt, lókuszdeléciót, mozaicizmust, vagy egy másik vizsgálatból származó, nem egyértelmű leletet kell tisztázni.

Következtetés

A sejtekben és szövetekben végzett közvetlen nukleinsav-hibridizáció nem elavult módszer, de nem is univerzális. Fő erőssége napjainkban abban rejlik, hogy pontos választ ad egy adott citogenetikai kérdésre: hogy egy adott gén jelen van-e, hol található, hány példányt tartalmaz egy sejt, és hogy történt-e átrendeződés. Ezért a módszer továbbra is fontos az onkohematológiában, a patomorfológiában, a reproduktív citogenetikában, valamint más vizsgálatokból származó vitatott eredmények tisztázásában.

A modern gyakorlat nem önmagában, hanem egy szélesebb diagnosztikai stratégia részeként igényli a használatát. Ahol teljes genom áttekintésre van szükség, a microarray analízis és a szekvenálás alkalmasabb. Ahol egy adott célpontra gyors és pontos válaszra van szükség, a célzott hibridizáció továbbra is az egyik leghasznosabb laboratóriumi eszköz.