A restrikciós fragmentum hosszúságú polimorfizmus elemzése
Utolsó ellenőrzés: 18.10.2021
Minden iLive-tartalmat orvosi szempontból felülvizsgáltak vagy tényszerűen ellenőriznek, hogy a lehető legtöbb tényszerű pontosságot biztosítsák.
Szigorú beszerzési iránymutatásunk van, és csak a jó hírű média oldalakhoz, az akadémiai kutatóintézetekhez és, ha lehetséges, orvosilag felülvizsgált tanulmányokhoz kapcsolódik. Ne feledje, hogy a zárójelben ([1], [2] stb.) Szereplő számok ezekre a tanulmányokra kattintható linkek.
Ha úgy érzi, hogy a tartalom bármely pontatlan, elavult vagy más módon megkérdőjelezhető, jelölje ki, és nyomja meg a Ctrl + Enter billentyűt.
A különböző restrikciós endonukleázok széles körű alkalmazása a kromoszomális DNS elemzéséhez hatalmas változatosságot mutatott az emberi genomban. A strukturális gének kódolási és szabályozási régióiban még kis változások is vezethetnek bizonyos fehérje szintézisének megszüntetéséhez vagy az emberi szervezetben fennálló funkciójának elvesztéséhez, ami általában befolyásolja a páciens fenotípusait. Azonban az emberi genom mintegy 90% -a nem kódoló szekvenciákból áll, amelyek változatosabbak és sok úgynevezett semleges mutációt vagy polimorfizmust tartalmaznak, és nincs fenotípusos expressziójuk. Az ilyen polimorf helyeket (lókuszokat) az örökletes betegségek genetikai markereként diagnosztizálják. Polimorf lókuszok vannak jelen minden kromoszómában és kapcsolódnak a gén meghatározott régiójához. Miután meghatároztuk a polimorf lókusz lokalizációját, meg lehet állapítani, hogy mely genomhoz kapcsolódik egy olyan mutáció, amely a páciens betegségét okozta.
A DNS polimorf régióinak izolálása céljából bakteriális enzimeket használnak - restrikciós enzimeket, amelyek terméke restrikciós hely. A polimorf helyeken előforduló spontán mutációk rezisztensek vagy ellenkezőleg érzékenyek egy specifikus restrikciós enzim hatására.
A restrikciós helyek mutációs variabilitását a korlátozott DNS-fragmensek hossza megváltoztatásával detektálhatjuk, elektroforézissel történő elkülönítéssel, majd a specifikus DNS-próbákkal való hibridizációval. Polimorf helyeken történő restrikció hiányában az elektroforembránokon egy nagy fragmentumot észlelnek, és ha jelen van, egy kisebb fragmens jelen lesz. A restrikciós hely jelenléte vagy hiánya a homológ kromoszómák azonos lokáiban lehetővé teszi a mutáns és a normál gén megbízható megnevezését, és nyomon követését az utódokhoz. Tehát a betegek DNS-vizsgálatánál mindkét kromoszómában, amelyekben egy restrikciós hely van jelen a polimorf régióban, a DNS rövid fragmenseit kiderítik az elektroforézisben. A polimorf restrikciós helyet módosító mutációval homozigóta betegeknél nagyobb hosszúságú fragmentumokat észlelnek, és heterozigóta fragmensekben rövid és hosszú fragmenseket mutatnak ki.
[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]