A hemoblasztózisok immunfenotipizálása

Az utóbbi években a hematológiai kutatásokban elért jelentős előrelépés a modern immunológiai módszerek és a perifériás vér és csontvelő sejtek automatizált elemzési és válogatási eszközeinek - az áramlási citométereknek - az alkalmazásával függ össze. A betegség szubsztrátsejtjeinek (vér, vörös csontvelő, nyirokcsomók, lép stb.) hagyományos morfológiai és citokémiai vizsgálata sok esetben, különösen a limfoproliferatív betegségekben, nem teszi lehetővé a morfológiailag hasonló formák közötti variánsok teljes skálájának azonosítását és a kóros klón eredetének forrásának megállapítását. Ezeket a problémákat csak a sejtek immunológiai jellemzőinek tanulmányozásával lehet megoldani. A hematopoietikus sejtek differenciálódásának minden szakasza megfelel a saját antigénkészletének, amelyet a nemzetközi osztályozás szerint differenciálódásnak neveznek, és differenciálódási klaszterekre, CD-re osztanak.

Neoplasztikus elváltozások esetén a differenciálódási blokk a normális sejtfejlődés bármely szakaszában előfordulhat, ami patológiás sejtek klónjának kialakulásához vezet, amelyek meghatározzák a betegség szubsztrátját, és azonos immunológiai (vagy fenotípusos) jellemzőkkel rendelkeznek. Ezen markerek sejteken történő vizsgálatával meghatározható, hogy a betegség mely formájának és variánsának felelnek meg, azaz a sejtek immunológiai fenotípusa alapján differenciáldiagnózist lehet végezni, ami a limfoproliferatív betegségekben a legnehezebb, mivel a betegség patológiás szubsztrátjának fő sejtjei morfológiailag szinte azonos sejtek.

A fenotipizálás lehetővé teszi monoklonális antitestek használatát a mielo-, mono- és limfocita sorozatú blaszt és érett vérsejtek típusának meghatározására a sejtfalban lévő differenciálódási antigének (receptorok) jelenléte alapján. Az „A szervezet immunállapotának felmérése” című szakasz részben ismerteti a sejtes markerek vizsgálatának jellemzőit és diagnosztikai értékét; az alábbiakban a sejtek antigén markereinek rövid leírása található a hemoblasztózisok diagnózisával kapcsolatban. A következő antigének (markerek) kimutathatók a vérsejtek és a vörös csontvelő membránjain.

• A CD2 egy monomer transzmembrán glikoprotein. A vérben keringő összes T-limfocita felszínén, valamint néhány NK-limfocitán is jelen van. A CD2 részt vesz a T-limfociták alternatív aktivációs folyamatában. A CD2 monoklonális antitestekkel történő kimutatását a klinikai gyakorlatban akut T-sejtes leukémia, limfómák, krónikus gyulladásos és immunhiányos állapotok fenotipizálására alkalmazzák.
• A CD3 egy antigénspecifikus T-sejt receptorhoz kapcsolódó fehérjekomplex, a T-limfociták fő funkcionális markere. Elősegíti az aktivációs jel átvitelét a membránról a sejt citoplazmájába. A CD3 meghatározása az akut T-sejtes leukémia, limfómák (a CD3 nem expresszálódik nem T-sejtes limfoid neoplazmákban) és immunhiányos betegségek diagnosztizálására javallt.
• A CD4 egy transzmembrán glikoprotein, amelyet a T-helperek (induktorok) alpopulációja expresszál, amelyek a perifériás vér limfocitáinak 45%-át teszik ki. A limfociták fejlődésének korai szakaszában, a csecsemőmirigyben, a CD4 antigéneket, valamint a CD8-at minden kérgi limfocita expresszálja. A medulláris timociták, amelyek fenotípusa hasonló a perifériás vér érett CD4+ T-sejtjeihez (T-helperek), már expresszálnak CD4 vagy CD8 receptorokat. A perifériás vérben a sejtek akár 5%-a is hordoz CD4 és CD8 markereket. A CD4 kisebb mértékű expressziója lehetséges a monocita sorozat egyes sejtjein. A CD4 a legtöbb T-sejtes limfómában expresszálódik, beleértve a mycosis fungoides-t is, valamint a HTLV-hez kapcsolódó T-sejtes leukémiában (HTLV - humán T-limfotropikus vírus).
• A CD5 egyláncú glikoprotein, amely minden érett T-limfocitán és a legtöbb timocitán jelen van, és a B-limfociták gyengén expresszálják. A CD5 a B-sejtes krónikus limfocitás leukémia és a centrocitás limfóma neoplasztikus sejtjeiben mutatható ki. Más típusú rosszindulatú limfoid betegségekben - follikuláris limfómában, szőrös sejtes leukémiában, nagysejtes limfómában - a CD5 nem expresszálódik.
• A CD7 egyláncú fehérje, a T-sejtek differenciálódásának legkorábbi markere. A pro-T-limfociták már a csecsemőmirigybe való vándorlásuk előtt expresszálják. A CD7 a legtöbb NK-sejten kimutatható, gyenge expresszió figyelhető meg a monocitákon. A B-limfociták és a granulociták nem tartalmazzák ezt az antigént. A CD7 meghatározását limfómák és gyermekkori T-sejtes limfoblasztos leukémia diagnosztizálására használják.
• A CD8 egy fehérje, amely két, diszulfidhidakkal összekapcsolt polipeptidláncból áll. Citotoxikus és szuppresszor T-limfociták egy alpopulációja expresszálja, amelyek a perifériás vér limfocitáinak 20-35%-át teszik ki. Ezt az antigént NK-limfociták, kortikális timociták, a medulláris timociták 30%-a és a vörösvértest-sejtek egy alpopulációja is expresszálja. A CD8-at a T-szupresszorok tartalmának meghatározására vizsgálják (lásd a fenti „Szuppresszor T-limfociták a vérben” című részt).

• A CD10 egy sejtmembránhoz kapcsolódó endopeptidáz. A CD10-et a B-limfociták fiatal formái és a kérgi limfociták egy alpopulációja expresszálja. A CD10-et minden ALL sejt expresszálja.
• A CD11c-t makrofágok, monociták, granulociták, NK-sejtek és szőrös sejtes leukémia sejtek expresszálják a sejtmembránon.
• A CD13 egy glikoprotein, amelyet a mielomonocita vonal sejtjei (progenitor sejtek, neutrofilek, bazofilek, eozinofilek, monociták és mieloid leukémia sejtek) expresszálnak. Hiányzik a T- és B-limfocitákból, az eritrocitákból és a vérlemezkékből.
• A CD14 egy felszíni membrán glikoprotein. Főként monociták és makrofágok expresszálják. A CD14 a monociták több mint 95%-ában kimutatható a perifériás vérben és a csontvelőben. A CD14 erős expressziója figyelhető meg akut mieloblasztos leukémiában. Ez az antigén nem expresszálódik akut és krónikus limfoblasztos leukémiában.
• A CD15 egy oligoszacharid. Részt vesz a fagocitózisban és a kemotaxisban. Ez az antigén érett granulociták és Berezovsky-Sternberg sejtek felszínén található. A CD15 antigén expressziója kimutatható Hodgkin-kórban. Nem-Hodgkin limfómákban a CD15 a legtöbb esetben nem kimutatható.
• A CD16 granulociták, monociták, makrofágok és NK-sejtek felszínén expresszálódik. Minden limfocita, amely ezt az antigént expresszálja, képes az antitest-függő sejtes citotoxicitásra. A CD16-ot krónikus mielocitás leukémiák tipizálása során határozzák meg az NK-sejtek jellemzésére.
• A CD19 egy glikoprotein, amely minden perifériás B-limfocitán és minden B-sejt prekurzoron jelen van. A plazmasejtekből hiányzik. Ez a B-sejtek legkorábbi markere, és fontos szerepet játszik a B-sejtek aktivációjának és proliferációjának szabályozásában. A CD19 az akut B-sejtes leukémia összes neoplasztikus sejtjén expresszálódik, és az akut monoblasztikus leukémia egyes formáiban is jelen van.
• A CD20 egy nem glikozilált fehérje. A B-limfociták ontogenezise során a CD20 antigén a CD19 után jelenik meg a limfociták pre-B-sejtes differenciálódásának szakaszában. Hiányzik a plazmasejtek plazmamembránjából. Expressziója előfordul ALL-ben, B-sejtes krónikus limfocitás leukémiában, szőrös sejtes leukémiában, Burkitt-limfómában és nagyon ritkán akut monoblasztikus leukémiában.
• A CD21 egy glikoprotein, amely jelentős mennyiségben van jelen a nyirokszervekben található B-limfocitákon, és kis mennyiségben a perifériás vér B-sejtjein. A CD21 az Epstein-Barr vírus receptora.
• A CD22 egy két polipeptidláncból álló fehérje. A legtöbb B-limfocita membránján expresszálódik, beleértve a prekurzor sejteket (prolimfocitákat). Az antigén aktiválásuk után nem expresszálódik a B-limfocitákon (plazmasejteken). A CD22 legkifejezettebb expressziója szőrös sejtes leukémiában, gyenge mieloid leukémiában és nem T-sejtes ALL-ben figyelhető meg.
• A CD23 egy glikoprotein, amelyet sokkal nagyobb mértékben expresszálnak az aktivált perifériás vér B-limfociták. A CD23 IgE-függő citotoxicitást és makrofágok és eozinofilek általi fagocitózist közvetít.
• A CD25 egyláncú glikoprotein, amelyet az IL-2 alacsony affinitású receptoraként azonosítottak. Ez a receptor az aktivált T-limfocitákon és kisebb sűrűséggel az aktivált B-sejteken expresszálódik. Egészséges egyének perifériás vérében az antigén a limfoid sejtek több mint 5%-án van jelen.
• A CD29 egy fibronektin receptor. Széles körben elterjedt a szövetekben, és leukociták expresszálják. A perifériás vérsejteken történő CD29 kimutatást a CD4+CD29+ fenotípusú T-sejtek egy alpopulációjának tipizálására használják, amelyeket 2-es típusú helpereknek (Th2) neveznek. Ezek a sejtek limfokinek termelésével vesznek részt a humorális immunválaszban.
• A CD33 egy transzmembrán glikoprotein. A mieloid és monocita sorozatú sejtek felszínén található. A perifériás vérben a monociták és kisebb mértékben a granulociták felszínén is megtalálható. A vörös csontvelősejtek körülbelül 30%-a expresszál CD33-at, beleértve a mieloblasztokat, promielocitákat és mielocitákat. Az antigén hiányzik a pluripotens őssejtek membránjaiból. A CD33 meghatározását a mieloid eredetű leukémiák sejtjeinek jellemzésére használják. A limfoid és eritroid eredetű leukémia sejtek nem expresszálják a CD33-at.
• A CD34 egy foszfoglikoprotein, amelyet hematopoietikus progenitor sejtek, beleértve a monopotens őssejteket is, expresszálnak. Az Ag legkifejezettebb expressziója a korai progenitor sejtekben figyelhető meg; a sejtek érésével a markerek expressziója csökken. A CD34 az endothelsejteken is megtalálható. A CD34 meghatározását az akut mieloblasztos és limfoblasztos leukémiák sejtjeinek jellemzésére használják. Krónikus limfocitás leukémiákban és limfómákban a CD34 antigén expressziója nem detektálható.

• A CD41a-t vérlemezkék és megakariociták expresszálják. A CD41a kimutatására szolgáló monoklonális antitesteket a megakarioblasztos leukémia diagnosztizálására használják. Glanzmann-thrombasthenia esetén ennek az antigénnek a expressziója hiányzik vagy jelentősen csökkent.
• A CD42b egy membránglikoprotein, amely két polipeptidláncból áll. A marker vérlemezkék és megakaryocyták felszínén detektálható. A klinikai gyakorlatban a CD42b kimutatását trombocitopátia - Bernard-Soulier szindróma - diagnosztizálására használják.
• A CD45RA a transzmembrán glikoproteinek osztályába tartozik. Gyakori leukocita antigén. A B-limfociták, kisebb mértékben a T-limfociták sejtmembránján és érett medulláris timocitákon expresszálódik. A markert a granulociták nem expresszálják.
• A CD45RO a CD45RA, egy gyakori leukocita antigén kis molekulatömegű izoformája. Kimutatták a T-sejteken (memória T-limfociták), a B-limfociták egy alpopulációján, monocitákon és makrofágokon. A CD45RO elleni monoklonális antitestek kölcsönhatásba lépnek a legtöbb timocitával, a nyugalmi CD4+ és CD8+ T-limfociták egy alpopulációjával, valamint az érett, aktivált T-sejtekkel. A mielomonocita eredetű sejtek, a granulociták és a monociták is hordozzák ezt az antigént. Centroblasztikus és immunoblasztikus limfómákban mutatható ki.
• A CD46 egy O-glikozilált dimer. Széles körben elterjedt a szövetekben, és T- és B-limfociták, monociták, granulociták, NK-sejtek, vérlemezkék, endothelsejtek és fibroblasztok expresszálják, de hiányzik a vörösvértestek felszínéről. A CD46 szöveti védelmet nyújt a komplementtel szemben.
• A CD61 egy vérlemezke antigén. A perifériás vér és a vörös csontvelő vérlemezkéin, valamint a megakariocitákon és megakarioblasztokon expresszálódik. Meghatározását markerként használják akut megakarioblasztos leukémiában. Glanzmann-thrombastheniában szenvedő betegeknél az antigén expressziója hiányzik vagy gátolt.
• A CD95, más néven Fas vagy APO-1, egy transzmembrán glikoprotein, a tumor nekrózis faktor receptor család tagja. Jelentős mennyiségben expresszálódik a perifériás vér T-limfocitáin (CD4+ és CD8+), valamint kisebb mértékben a B-limfocitákon és az NK-sejteken. Ez az antigén granulocitákon, monocitákon, szöveti sejteken és neoplasztikus sejteken is expresszálódik. A CD95 Fas ligandhoz (CD95L) való kötődése apoptózist indukál a sejtekben.
• A CD95L, vagy Fas ligand, egy membránfehérje, amely a tumor nekrózis faktor receptor családjába tartozik. Ezt az antigént citotoxikus T-limfociták, NK-sejtek és nagyon gyakran tumorsejtek is expresszálják; ez a sejtek apoptózisának fő induktora.
• A HLA-DR az emberi fő hisztokompatibilitási komplex (HLA) II. osztályú molekuláinak monomorf determinánsa. A marker Langerhans-sejteken, nyirokszervek dendritikus sejtjein, bizonyos típusú makrofágokon, B-limfocitákon, aktivált T-sejteken és tímusz hámsejtjein expresszálódik. E marker vizsgálatát a CD3+ HLA-DR+ fenotípusú aktivált T-limfociták mennyiségi meghatározására használják.

A markerekkel szembeni eltérő monoklonális antitestek felhasználásával lehetőség van a leukémia adott formájára jellemző sejtek fenotípusos portréjának létrehozására.

A hemoblasztózisok diagnosztizálásában és differenciáldiagnosztikájában alkalmazott immunfenotípus-meghatározási módszerek mellett különösen fontosnak bizonyult alkalmazásuk a kezelési folyamatban a remisszió állapotának és a leukémiás sejtek reziduális populációjának felmérésére. Ismerve a blasztsejtek fenotípusos „portréját” a diagnózis időszakában, ezek a markerek lehetővé teszik a leukémiás klón sejtjeinek kimutatását a remisszió időszakában, és számuk növekedésével a relapszus kialakulásának előrejelzését jóval a klinikai és morfológiai tünetek megjelenése előtt (1-4 hónappal).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]