A herpesz diagnosztizálása

Diagnózis a herpesz alapul a magatartása a klasszikus vírusürítés érzékeny sejttenyészetekben, immunfluoreszcens és szerológiai módszerek, elvégzése kolposzkópos vizsgálatok alkalmazásával modern molekuláris-biológiai módszerek (PCR, dot-hibridizációs), amely lehetővé teszi, hogy diagnosztizálni az összes herpeszvírus csoport, beleértve a HHV-6 és HHV-7 típusok.

Herpetikus fertőzés laboratóriumi diagnózisának módszerei

A fő módszerek a HSV kiválasztására vagy a vírusrészecskék és / vagy komponensek kimutatására	Segéd eszközök a HSV antitestek kimutatására az emberi test biológiai folyadékaiban
A HSV izolálása a sejtek és az állatok érzékeny kultúráiban Közvetlen és immunimmunmikroszkópia Közvetlen és közvetett MFA-lehetőségek IFA Molekuláris biológiai eljárások Latex agglutinációs reakció	Semlegesítési reakció RSK A HSV-1,2 nemstrukturális fehérjéinek antitestek meghatározása

Kimutatták, hogy a betegek 76% -ánál a HSV-2 által okozott genitális herpesz (GH) és 24% -a HSV-1 típusú. A GG monoinfekcióként csak a betegek 22% -ánál fordult elő, az esetek 78% -ában kimutatták a mikroorganizmusokat. A betegek 46% -ánál két kórokozó által okozott parazitocenózist észleltek, beleértve a cslamidit is az esetek 40% -ában. Kevésbé a feltűntetett kenetekben Gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

A betegek 27% -ában a parazitocenózist három, és 5,2% négy kórokozóval reprezentálta. És gyakrabban volt a klamidia kombinációja Gardnerella és Candida gombákkal. Ezek az adatok igazolják, hogy szükség van egy alapos bakteriológiai vizsgálata betegek YY azonosítani a patogén ágens kombinációk, valamint a mélyreható tanulmányt a patogenezisében kevert fertőzések az urogenitális traktus, amely lehetővé tenné egy differenciált komplex terápia a HSV fertőzés.

A HSV izolálásában vizsgált anyagok a herpetikus elváltozások lokalizációjától függően

A sérülések lokalizálása	A hólyagok tartalma	Cellkaparózás				SMZ	Vigyázz a hörgőkből	Csonthengerek	Vér
		1	2	3	4
Bőr	+								+
Szemek			+						+
Nemi szervek				+					+
Végbélnyílás	+				+				+
Száj	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Tüdő		+					+		+
A máj								+	+
Congenital Herpes	+	+	+				+		+

A cytomegalovírus fertőzés laboratóriumi diagnózisának módszerei

Mód	Az eredmények eléréséhez szükséges idő	Jegyzetek
Virológiai
Elektronmikroszkópia	3 óra	Malodostupen
A vírus izolálása a sejttenyészetben (CPD)	4-20 nap	Normál, lassú
A korai AH immunofluoreszcens festése monoklonális antitestekkel	6 óra	Kevésbé specifikus
TSITOLOGICHESKIY	2-3 óra	Kevésbé specifikus
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 nap	Standard
Ssubsistence	1 nap	Időigényes
RIF	6 óra	Egyszerű, egyedi
NRIF	6 óra	összetett
RIMF	6 óra	összetett
IFA (IgM, TO)	6 óra	Gyors, egyszerű
Immun	6 óra	Drága
Molekuláris biológiai
MG	5-7 nap	Költséges, időigényes
PCR	3 óra	Drága

A herpes zoster vírus diagnózisának módszerei

Diagnosztikai módszerek	Laboratóriumi technikák
INDIRECT
Kiosztás	Szövetkultúra, csirke embriók, laboratóriumi állatok, együttes termesztés engedélyező sejtekkel vagy helper vírusokkal
Az izolátumok azonosítása	Semlegesítési reakció, DSC, IF, IPPE, csapadék izolátumok reakciója, agglutináció, IF
STRAIGHT
Citológia	Kenetek: színes immunfluoreszcencia
Szövettan	A sejt patomechanizmusa
Struktúra	Embrionális mikroszkópia, immunoelektromos mikroszkópia
Az antigének meghatározása	IF, PIÉF, RIM, IFA
Antitestek helyi termelésének meghatározása	Ig M, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekuláris biológiai megközelítések	Molekuláris hibridizáció, PCR

A herpes zoster vírus által okozott fertőzés laboratóriumi diagnózisa

Diagnosztikai problémák	Mód	Várható eredmények
Akut primer fertőzés	1	Detektálás 2 óra múlva
	2	Az ellenanyagok szintje lassan növekszik
	3	A fertőzés után 3 nappal jelenik meg
Akut újraaktivált fertőzés	1	ULV detektálása 2 óra alatt
	2	Az ellenanyagok szintje lassan növekszik
	4	Jelenleg 4 nappal a kiütések megjelenése után

1. a WIEF hólyagjainak folyadékban való meghatározása;
2. szerológia: DSC, ELISA, amelynek célja az azonosulás
3. szerológia: ELISA, amelynek célja az IgM kimutatása;
4. szerológia: ELISA, amelynek célja az IgA, IgM kimutatása.

A herpes zoster vírus által okozott fertőzés immunválaszt mutató módszerek

Megközelítés	Módszer
A megnövekedett antitest titer detektálása a második szérumban	RSK, RTGA, RPGA, semlegesítő reakció IF, RIM, ELISA
Az IgG, Ig A osztályspecifikus antitestek kimutatása az első szérummintában	IFA, IF, RIM, latex-agglutináció

A betegszérumok herpeszvírus fertőzésekkel (ELISA) végzett szerológiai vizsgálat eredményeinek értelmezése

A fertőzés / marker neve	A fertőzések átlag küszöbértékei
	Elemzési eredmények	értelmezés
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Pozitív 1-6 pozitív 6-10 pozitív> 10 negatív pozitív 100-300 negatív <90 kétes 90-100	Remisszió A betegség súlyosbodása A betegség akut fázisa Nincs fertőzés (betegség) A betegség akut fázisa Ismételje meg az elemzést 2-3 hét után
Herpes simple 1,2 szerotípus Anti-HSV 1/2 összesen. (100-900%)	Pozitív 100-400 Pozitív 400-800 Pozitív> 800 Negatív <100	Remisszió A betegség súlyosbodása A betegség akut fázisa Nincs fertőzés (betegség)

A táblázat bemutatja a herpeszvírus fertőzések laboratóriumi diagnosztikájának legfontosabb módszereit, valamint a HSV izolálásában tanulmányozott biológiai anyagokat is ajánlja, figyelembe véve a herpeszes léziók lokalizációját

Megbízható a herpes simplex és a CMV feloszlatása érzékeny sejttenyészetek fertőzésével. Így a relapszus időszakában 26 beteg virológiai vizsgálata során a HSV-t izolálták érzékeny Vero sejtkultúrán 23 esetben (88,4%). A fertőzött tenyészetekben megfigyelték a HSV-re jellemző citopátiás hatások kialakulását - többmagvú óriássejtek képződését vagy a lekerekített és megnagyobbodott sejtek felgyülemlését fürtök formájában. Az esetek 52,1% -ában a vírus citopátiás hatását a fertőzés után 16-24 órával lehetett kimutatni. A fertőzött tenyészetek 48-72 órás inkubálásával a sejtpusztulással járó anyagok aránya 87% -ra emelkedett. És csak az esetek 13% -ában pozitív eredményeket észleltek 96 órával a fertőzés után, és többször, vagy ismételt passzálással.

Az általános herpetikus fertőzés laboratóriumi diagnózisának módszerei

A fő módszerek a herpeszvírusok, azok részecskéinek és összetevőinek kimutatására (izolálására) irányulnak	Kiegészítő módszerek a herpeszvírusok biológiai folyadékok elleni antitestek kimutatására, a vérszérum enzimatikus eltolódásának kimutatására
Izolálása Herpes vírus fogékony sejttenyészetben és állati Közvetlen és Immun-elektronmikroszkópia Közvetlen és közvetett immunperoxidáz eljárás megvalósításaiban Közvetlen és közvetett fluoreszcens antitest technika opciók opciók ELISA megvalósításai molekuláris (DNS-DNS) hibridizáló Polymerase Chain Reaction Reaction latex agglutináció	Semlegesítés reakció komplement fixálás reakciót latex agglutináció indirekt fluoreszcens antitest módszerrel megvalósítási mód indirekt immunperoxidáz módszerrel variáns megvalósítások ELISA módszer immun-blot radiális komplement megkötése módszer meghatározása alanin és aszpartát szinteket

A fertőző mononucleosis (VEB okozta fertőzés) diagnosztizálására szerológiai módszereket alkalmaznak. Reakció Paul-Bunnelya birka eritrociták, a titere 1:28, diagnosztikai és a fenti egyetlen vizsgálat szérum, vagy 4-szeres antitest növekedést vizsgálatakor párosított szérumok. A Goff-Bauer-reakciót a ló 4% -os formalizált vörösvérsejtjeinek szuszpenziójával végezzük. Az eredményt 2 perc elteltével veszik figyelembe, fertőzéses mononukleózis esetén a reakció nagyon specifikus.

Jelenleg egy enzim immunvizsgálatot (ELISA) fejlesztenek ki a fertőző mononukleózis diagnosztizálására. Ebben az esetben a páciens szérumában lévő IgG és IgM antitesteket EBV-vel fertőzött limfoblasztokkal inkubáljuk, majd fluoreszcens antitestekkel végzett kezelést. A betegség akut időszakában a virális kapszid antigén elleni antitesteket 1: 160 és annál nagyobb titerben határozzuk meg.

Amikor egy számú importált kereskedelmi vizsgálati rendszerek IFA képes azonosítani: antitestek hangya Egan EBV borítékot antitestek korai antigén EBV, a teljes antitest egy korai antigén EBV, meghatározva az akut fázisban a betegség és a sejtmagban és a citoplazmában, és a korlátozott antitest EBV korai, meghatározva az akut fázisban a betegség és a sejtmagban, és a sejtek citoplazmájában, korlátos antitestek EBV korai antigén, meghatározva a közepén a betegség csak a sejtek citoplazmájában, és az antitestek EBV nukleáris antigén. Ezekkel a vizsgálati rendszerek lehetővé teszi a differenciál diagnosztikájában számos betegség kapcsolatos EBV.

Miután a pozitív ELISA azonosítani az ellenanyagok EBV adnak immunoblot megerősítő válasz, amely érzékeli az antitestek jelenlétét elválasztásához EBV marker fehérjék (p-proteinek): P23, P54, P72 (a fehérje jelenlétét a lehetőségét sugallja reprodukciós EBV), p 138. Said fenti laboratóriumi módszerekkel nyomon követésére a kezelés hatékonyságát.

A virológiai módszerek érzékenysége 85-100%, a specifitás 100%, a vizsgálati idő 2-5 nap. Gyakran a gyakorlatban a közvetlen immunfluoreszcencia (PIF) módszer a HSV-1 és a HSV-2 elleni poliklonális vagy monoklonális antitestekkel történik. Az UIF módszer könnyen reprodukálható egy hagyományos klinikai laboratóriumban, nem költséges, az érzékenység 80% feletti, a specifitás 90-95%. Immunfluoreszcens mikroszkópia jelenlétét mutatta ki a citoplazmatikus zárványok, morfológiai jellemzők, a százalékos fertőzött sejtek a kenetek, lekaparja húgycső, méhnyak, a méhnyak, a végbél.

Az UIF módszer ötletet ad a sejtek morfológiai tulajdonságairól és a HSV antigének lokalizációjáról. A herpeszvírusok (a specifikus lumineszcencia kimutatása) közvetlen károsodásai mellett a herpesz fertőzés indirekt jelei vannak az UIF adatok alapján:

• a nukleáris anyag aggregációja, a karyoolma hámlása;
• jelenléte az úgynevezett. Magok "lyukak", amikor csak egy karyolemma marad a sejtmagtól;
• az intranukleáris zárványok jelenléte - Caudry's calf.

Amikor beállítja a UIF orvos megkapja nem csak a minőségi, hanem mennyiségi értékelését a fertőzött sejtek, hogy mi volna használni, hogy értékelje a hatékonyságát antivirális terápia acyclovir (AC). Így 80 egyszerű genitális herpeszes (GG) beteget vizsgáltunk dinamikusan az UIF módszerrel. Az eredmények azt mutatják, hogy ha a, kezelés előtt acyclovir kenetek 88% -ánál volt nagy százalékban fertőzött sejtek (50-75% felett), miután az egyik során acyclovir kenetek 44% -ánál egészséges sejtek kimutatható esetek 31% -ában vannak jelölve az egyes fertőzött sejtek és A betegek 25% -ánál a fertőzött sejtek legfeljebb 10% -a volt.

A genitális herpeszes betegek által az acyclovir-nel kezelt fertőzött sejtek tartalma (PIF reakció)

Betegség periódusai	Százalék százalékban
	Fertőzött sejteket					Normál sejtek
	Több mint 75%	50-75%	40-50%	10%	Egyetlen sejtek n / sp
Relapszus (kezelés előtt)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisszió (kezelés után)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

A sok éves befektetési és az eljárás a dot-hibridizáció megfigyelt közel 100% -a közötti megállapodás a tanulmány eredményeit. Meg kell jegyezni, hogy annak érdekében, hogy növelje a megbízhatóságot diagnózisának GH, különösen azokban az esetekben, ahol a szubklinikai és malomanifestnyh formák herpesz, akkor ajánlott használni 2-3 módszer laboratóriumi diagnosztika, különösen, ha megvizsgálja a terhes nők, a nők pedig a szülészeti történelem hátrányos helyzetű, fogyatékkal meghatározatlan nőgyógyászati diagnózis.

Így PCR diagnosztizálására vírusos és bakteriális fertőzések az urogenitális traktus szükséges, hogy értékelje a pozitív eredményeket kaptunk a történelem, a jelenléte (vagy hiánya) a specifikus klinikai tüneteket. Ha a chlamydia PCR-vel detektálódik, akkor ebben az esetben fertőzésről beszélhetünk, és ennek megfelelően megoldhatjuk a terápia problémáit. Feltárása esetén a mycoplasmák (ureaplasmas) opportunista patogének, a diagnózis megerősítésére kell folytatnia a kultúra további vizsgálatok, t. E. Crop anyagot a beteg érzékeny sejttenyészetek. Csak akkor, ha pozitív eredményeket kapunk a tenyésztés analízisében, beszélhetünk a mycoplasmosis diagnózisának laboratóriumi megerősítésére. Ugyanez a módszer lehetővé teszi, ha szükséges, az izolált mikoplazmáknak a gyakran használt gyógyszerek (antibiotikumok, fluorokinolonok stb.) Érzékenységét.

Talán az egylépcsős fertőzés a Nepresviridae család több vírusával. Gyakran felfedeztük egy beteg HSV-1, HSV-2 és CMV vírus fertőzését. Többszörös herpeszvírussal fertőzött betegeknél a szekunder IDS klinikai és laboratóriumi megnyilvánulásaiban szenvedő betegek (oncohematológiai, onkológiai, HIV-fertőzött betegek) voltak. Így kimutatták, hogy a HIV-fertőzéssel járó klinikai és immunológiai rendellenességeket a molekuláris hibridizáció által kimutatott herpeszvírusok számának növekedése kísérte. Ebben a prognosztikailag legjelentősebbnek tekinthető a HSV-1, CMV és HHV-6 típusú DNS komplex egylépcsős kimutatása.

[1], [2], [3]