Kariotipizálás

A kromoszómák vizsgálatához gyakran használnak rövid távú vérkultúrákat, valamint csontvelő-sejteket és fibroblasztkultúrákat. Az antikoaguláns laboratóriumba juttatott vért centrifugáljuk a vörösvérsejtek kicsapódása céljából, és a leukocitákat 2-3 napig inkubáljuk a tápközegben. Phytohemagglutinint adunk a vérmintához, mivel felgyorsítja az eritrociták agglutinációját és stimulálja a limfociták felosztását. A kromoszómák vizsgálatának legmegfelelőbb fázisa a mitózis metafázis, így a kolhicin a limfociták felosztásának megállítására szolgál ebben a szakaszban. A hatóanyag hozzáadása a tenyészethez a metafázisban lévő sejtek arányának növekedéséhez vezet, azaz a sejtciklus azon szakaszában, amikor a kromoszómákat legjobban látják. Minden kromoszóma megismétli (saját példányt állít elő), és a megfelelő színezés után a centromérhoz vagy a központi összehúzódáshoz kapcsolódó két kromatid formájában látható. A sejteket ezután hipotóniás nátrium-klorid-oldattal kezeljük, rögzítjük és megfestjük.

A kórokozók kromatografálásához gyakoribbak a Romanovsky-Giemsa festék, 2% acetaminomin vagy 2% acetazarin. A kromoszómákat teljesen, egyenletesen festik (a rutin módszer), és felhasználhatók az emberi kromoszómák numerikus anomáliáinak azonosítására.

A kromoszómák szerkezetének, az egyes kromoszómák azonosításának (azonosítása) vagy szegmenseik részletes ábrázolásához különféle differenciálfestési módszereket alkalmaznak. A leggyakrabban használt módszerek a Giemsa, valamint a G- és Q-hajlítás. A gyógyszer mikroszkópos vizsgálata a kromoszóma hosszúsága mentén festett (heterochromatin) és festetlen (euchromatin) sávokat tár fel. A keresztirányú csík karakteres jellege ebben az esetben lehetővé teszi a kromoszómák azonosítását a készletben, mivel a csíkok váltakozása és méretei szigorúan egyediek és állandóak minden pár esetében.

Az egyes sejtek metafázis lemezeit fényképezzük. Az egyes kromoszómákat kivágják a fényképekből, és a papírlapra ragasztják; a kromoszómák ilyen képeit kariotípusnak nevezik.

A további festés alkalmazása, valamint a kromoszóma-készítmények megszerzésének új módszerei, amelyek lehetővé teszik a kromoszómák hosszúságának meghosszabbítását, jelentősen növelik a citogenetikai diagnosztika pontosságát.

Egy speciális nómenklatúrát fejlesztettek ki az emberi kariotípus leírására. Egy férfi és egy nő normális karyotípusát 46-nak, XY-nek és 46-nak, XX-nek nevezik. A Down-szindrómában, amely egy további 21-es kromoszóma (21-es triszóma) jelenlétével jellemezhető, a nők karyotípusát 47, XX 21+ és férfiak - 47, XY, 21+ jellemzik. A kromoszóma szerkezeti anomáliájának jelenlétében meg kell jelölni egy megváltozott hosszú vagy rövid karot: a p betű egy rövid karot, egy hosszú karot és egy transzlokációt jelöl. Tehát, amikor az 5-ös kromoszóma rövid karját (a "cat-cry" szindrómát) törlik, a női kariotípus leírása 46, XX, 5p-. A Down szindrómával átültetett gyermek anyja - a 14/21 kiegyensúlyozott transzlokáció hordozója 45, XX, t (14q, 21q) kariotípusú. A transzlokációs kromoszóma akkor alakul ki, amikor a 14 és 21 kromoszóma hosszú karja egyesül, a rövid vállak elveszik.

Mindegyik vállát körzetekre osztják, ezek viszont szegmensekké alakulnak, és ezek és mások arab számokkal vannak jelölve. A kromoszóma centromere a kiindulási pont a régiók és szegmensek számolásához.

Így a kromoszómák topográfiájához négy markert használnak: kromoszóma szám, váll szimbólum, területszám és szegmensszám az adott régióban. Például 6p21.3 rekord azt jelenti, hogy beszélünk a 6. Kromoszóma pár, a rövid karján, terület 21 részes 3. Több választható karakter, különösen Pter - a végén a rövid kar, qter - vége a hosszú karja.

A citogenetikai kutatási módszer lehetővé teszi a kromoszómák delécióinak és egyéb változásának kimutatását csak körülbelül 1 millió bázis (nukleotid) méretben.

[1], [2], [3], [4]