Karyotipizálás

A kromoszómák vizsgálatára leggyakrabban rövid távú vértenyészeteket, csontvelősejteket és fibroblaszt tenyészeteket használnak. A laboratóriumba szállított antikoagulánssal átitatott vért centrifugálják az eritrociták ülepítése érdekében, majd a leukocitákat 2-3 napig táptalajban inkubálják. A vérmintához fitohemagglutinint adnak, mivel ez felgyorsítja az eritrociták agglutinációját és serkenti a limfociták osztódását. A kromoszómák vizsgálatára legalkalmasabb fázis a mitózis metafázisa, ezért a kolhicint ebben a szakaszban alkalmazzák a limfociták osztódásának leállítására. Ennek a gyógyszernek a tenyészethez való hozzáadása a metafázisban lévő sejtek arányának növekedéséhez vezet, azaz a sejtciklus azon szakaszában, amikor a kromoszómák a leginkább láthatók. Minden kromoszóma replikálódik (saját másolatot hoz létre), és megfelelő festés után két kromatidaként látható, amelyek a centromérhoz, vagyis centrális összehúzódáshoz kapcsolódnak. A sejteket ezután hipotóniás nátrium-klorid-oldattal kezelik, fixálják és festik.

A kromoszómák színezéséhez leggyakrabban Romanovsky-Giemsa festéket, 2%-os acetkarmint vagy 2%-os acetarzeint használnak. Ezek a kromoszómákat teljesen, egyenletesen színezik (rutin módszer), és felhasználhatók az emberi kromoszómák numerikus rendellenességeinek kimutatására.

A kromoszóma szerkezetének részletes képének megszerzéséhez, az egyes kromoszómák vagy szegmenseik azonosításához (meghatározásához) a differenciálfestés különböző módszereit alkalmazzák. A leggyakrabban használt módszerek a Giemsa-festés, valamint a G- és Q-sávozás. A kromoszóma hosszában végzett preparátummikroszkópos vizsgálat során számos festett (heterokromatin) és festetlen (eukromatin) sáv látható. Az így kapott transzverzális csíkozás jellege lehetővé teszi a készletben lévő egyes kromoszómák azonosítását, mivel a sávok váltakozása és méretük szigorúan egyedi és állandó minden pár esetében.

Az egyes sejtek metafázisos lemezeit lefényképezik. Az egyes kromoszómákat kivágják a fényképekről, és sorrendben egy papírlapra ragasztják; ezt a kromoszómaképet kariotípusnak nevezik.

A további festés, valamint a kromoszóma-készítmények előállítására szolgáló új módszerek, amelyek lehetővé teszik a kromoszómák hosszának meghosszabbítását, jelentősen növelik a citogenetikai diagnosztika pontosságát.

Az emberi kariotípus leírására speciális nómenklatúrát fejlesztettek ki. A férfi és női normál kariotípust rendre 46, XY és 46, XX jelölik. Down-szindróma esetén, amelyet egy további 21-es kromoszóma jelenléte (21-es triszómia) jellemez, a női kariotípust 47, XX 21+, a férfiét pedig 47, XY, 21+ jelöli. A kromoszóma szerkezeti rendellenességének jelenlétében meg kell jelölni a megváltozott hosszú vagy rövid kart: a p betű a rövid kart, a q a hosszú kart, a t pedig a transzlokációt jelöli. Így az 5-ös kromoszóma rövid karjának deléciója (cri du chat szindróma) esetén a női kariotípust 46, XX, 5p- jelöli. A transzlokációval rendelkező Down-szindrómás gyermek édesanyjának, a kiegyensúlyozott 14/21-es transzlokáció hordozójának kariotípusa 45, XX, t(14q; 21q). A transzlokációs kromoszóma a 14-es és 21-es kromoszómák hosszú karjainak összeolvadásával jön létre, a rövid karok pedig elvesznek.

Minden kar régiókra oszlik, amelyek viszont szegmensekre oszlanak, amelyeket arab számokkal jelölnek. A kromoszóma centromerje a kiindulópont a régiók és szegmensek számlálásához.

Így a kromoszóma topográfiájához négy címkét használunk: a kromoszómaszámot, a kar szimbólumát, a régiószámot és a szegmensszámot a régión belül. Például a 6p21.3 bejegyzés azt jelenti, hogy a 6. kromoszómapár 6. kromoszómájáról, annak rövid karjáról, a 21. régió 3. szegmenséről beszélünk. Vannak további szimbólumok is, különösen a pter - a rövid kar vége, a qter - a hosszú kar vége.

A citogenetikai kutatási módszer lehetővé teszi a kromoszómákban csak körülbelül 1 millió bázis (nukleotid) méretű deléciók és egyéb változások kimutatását.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]