A cikk orvosi szakértője
Új kiadványok
Polimeráz láncreakció (PCR) a fertőző betegségek diagnosztikájában
Utolsó ellenőrzés: 05.07.2025
Minden iLive-tartalmat orvosi szempontból felülvizsgáltak vagy tényszerűen ellenőriznek, hogy a lehető legtöbb tényszerű pontosságot biztosítsák.
Szigorú beszerzési iránymutatásunk van, és csak a jó hírű média oldalakhoz, az akadémiai kutatóintézetekhez és, ha lehetséges, orvosilag felülvizsgált tanulmányokhoz kapcsolódik. Ne feledje, hogy a zárójelben ([1], [2] stb.) Szereplő számok ezekre a tanulmányokra kattintható linkek.
Ha úgy érzi, hogy a tartalom bármely pontatlan, elavult vagy más módon megkérdőjelezhető, jelölje ki, és nyomja meg a Ctrl + Enter billentyűt.
A PCR egyike azon DNS-diagnosztikai módszereknek, amelyek lehetővé teszik a baktériumok vagy vírusok genomjának (DNS-ének) detektált szakaszának másolatszámának milliószoros növelését a DNS-polimeráz enzim segítségével. Az adott genomra specifikus vizsgált nukleinsavszakaszt sokszor megsokszorozzák (amplifikálják), ami lehetővé teszi azonosítását. Először a baktériumok vagy vírusok DNS-molekuláját melegítéssel két láncra osztják, majd szintetizált DNS-primerek jelenlétében (a nukleotidszekvencia a meghatározandó genomra specifikus) ezek a DNS komplementer szakaszaihoz kötődnek, és minden primer után termostabil DNS-polimeráz jelenlétében szintetizálják a második nukleinsavláncot. Két DNS-molekulát kapnak. A folyamatot sokszor megismétlik. Egy DNS-molekula, azaz egy baktérium- vagy vírusrészecske elegendő a diagnosztikához. Egy további lépés bevezetése a reakcióba - a DNS-szintézis egy RNS-molekulán reverz transzkriptáz enzim segítségével - lehetővé tette az RNS-vírusok, például a HCV-vírus tesztelését. A PCR egy háromlépcsős folyamat, amely ciklikusan ismétlődik: denaturáció, primer anneálás, DNS-szintézis (polimerizáció). A szintetizált DNS mennyiségét ELISA-val vagy elektroforézissel azonosítják.
A PCR különféle biológiai anyagokat használhat - vérszérumot vagy plazmát, húgycsőkaparást, biopsziát, pleurális folyadékot, agy-gerincvelői folyadékot stb. A PCR-t elsősorban fertőző betegségek, például vírusos hepatitis B, vírusos hepatitis C, vírusos hepatitis D, CMV-fertőzés, szexuális úton terjedő fertőzések (gonorrhoea, chlamydia, mycoplasma, ureaplasma fertőzések), tuberkulózis, HIV-fertőzés stb. diagnosztizálására használják.
A PCR előnye a fertőző betegségek diagnosztizálásában más kutatási módszerekkel szemben a következő:
- a fertőző ágens a test bármely biológiai környezetében kimutatható, beleértve a biopszia során nyert anyagot is;
- a fertőző betegségeket a betegség legkorábbi szakaszában lehet diagnosztizálni;
- lehetőség van a kutatási eredmények kvantitatív értékelésére (hány vírust vagy baktériumot tartalmaz a vizsgált anyag);
- a módszer magas érzékenysége; például a hepatitis B vírus DNS-ének vérből történő kimutatására szolgáló PCR érzékenysége 0,001 pg/ml (körülbelül 4×102 kópia /ml), míg az elágazó próbákat alkalmazó DNS-hibridizációs módszer érzékenysége 2,1 pg/ml (körülbelül 7×105 kópia /ml).
[