A-vitamin a vérben

Az A-vitamin (retinol) vérszérumkoncentrációjának referenciaértékei (normái): 1-6 éves gyermekeknél - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 éveseknél - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 éveseknél - 0,91-2,51 μmol/l; felnőtteknél - 1,05-2,09 μmol/l.

Az A-vitamin egy zsírban oldódó vitamin, és két formában létezik: maga az A-vitamin, vagy retinol (csak állati termékekben található meg), és az A-provitamin, más néven karotin (állati és növényi termékekből nyerhető), amely az emésztőrendszer falában retinollá alakulhat. Az étrendi retinol körülbelül 50-90%-a felszívódik a vékonybélben, és kilomikronhoz kötött komplexben a májba szállítódik, ahol retinol-palmitátként tárolódik. Szükség esetén a véráramba kerül, retinol és A-vitamin-kötő fehérje komplexeként. A vérszérumban az A-vitamin-kötő fehérje + retinol komplex a transztiretinhez kötődik. A vérszérumból a retinolt a célsejtek, például a retina és a hám fotoreceptorai veszik fel.

Amikor a szervezet a szükségesnél nagyobb mennyiségben kap A-vitamint (napi 180-430 mcg retinol, kortól, nemtől és fiziológiai állapottól függően), a feleslege a májban rakódik le, és vitaminraktárt képez. Amikor a retinol bevitele csökken az élelmiszerrel, a májból származó tartalékai a véráramba kerülnek, így a retinol koncentrációja a vérszérumban normális szinten marad (0,7 μmol/l felett). Az A-vitamin más biológiailag aktív formái (retinál és retinolsav) nagyon alacsony koncentrációban (0,35 μmol/l alatt) vannak jelen a vérben; a retinol-észterek az összes A-vitamin körülbelül 5%-át teszik ki (0,1-0,17 μmol/l).

Az A-vitamin fontos szerepet játszik az oxidációs-redukciós folyamatokban. A retinol elősegíti a glikogénképződést a májban és az izmokban, segít növelni a vér koleszterinszintjét, és részt vesz a szteroid és nemi hormonok szintézisében. Szükséges a csontrendszer növekedéséhez és kialakulásához, a rodopszin újraszintéziséhez, valamint elősegíti a nyálkahártyák és a bőr hámrétegének normális működését, megakadályozva annak metapláziáját, hiperkeratózisát és túlzott hámlását. Az A-vitamin segít erősíteni a hajat, a fogakat és az ínyt. Az utóbbi években kimutatták az A-vitamin sokrétű szerepét a rák megelőzésében és az immunitás szabályozásában (szükséges a fagocitózis befejezéséhez, fokozza az Ig szintézist, serkenti a T-killerek képződését, stimulálja a II-es típusú T-helpereket stb.). Az A-vitamin aktív antioxidáns, főként E-vitamin jelenlétében hat; védi a C-vitamint az oxidációtól. Az A-vitamin hiányát a rosszindulatú daganatok kockázati tényezőjének tekintik. Kísérleti vizsgálatok kimutatták, hogy az A-vitamin tartalmának növelése az étrendben 17,5%-kal növeli a várható átlagos élettartamot. A cink esszenciális kofaktor az A-vitamin anyagcseréjében (szükséges az A-vitamin-kötő fehérje szintéziséhez).

A felnőttek (20-50 évesek) átlagos napi retinolszükséglete 1,2 mg (4000 NE, 1 NE 0,3 mcg retinolnak felel meg), terhes nőknek - 1,5 mg (5000 NE), szoptató nőknek - 1,8 mg (6000 NE), 60 év felettieknek - 2,5 mg (10 000 NE). A retinol napi szükségletének legalább egyharmadát késztermékben kell a szervezetbe juttatni; a többit karotinoidok fogyasztásával lehet fedezni, amelyekből a szervezetben retinol képződik. Figyelembe kell venni, hogy az élelmiszerekben található retinol körülbelül 30%-a elbomlik a hőkezelés során. A retinol aktivitása kétszerese a karotinénak, ráadásul utóbbinak csak 30-40%-a szívódik fel a bélben. Ezért az étrend értékelésekor úgy vélik, hogy 1 mg retinol körülbelül 6 mg karotinoidnak felel meg.

Retinol (A-vitamin) és karotinoidok meghatározása vérszérumban Bessey szerint, L. Anisimova módosításával

A módszer alapelve

Az A-vitamin és a karotinoidok meghatározása lúgos alkoholos oldatban történő hidrolízisen, majd szerves oldószerek keverékével történő extrakción alapul.

Reagensek

• 11 M kálium-hidroxid (KOH) oldat.
• 96%-os etil-alkohol.
• 1 M kálium-hidroxid (KOH) oldat 96%-os etil-alkoholban: 1 térfogatrész 11 M KOH oldatot 10 térfogatrész 96%-os etil-alkohollal összekeverünk. A reagenst a vizsgálat napján készítjük el. Ha keverés közben elszíneződés történik, az alkoholt felhasználás előtt desztillációval tisztítani kell.
• Xilol, kémiailag tiszta
• Oktánszám, kémiailag tiszta
• Xilol-oktán keverék: egyenlő térfogatú xilol és oktán összekeverésével állítjuk elő.

A vizsgálatokat spektrofotométerrel végzik.

Az A-vitamin meghatározásának folyamata

Az ujjból vett vért (kb. 1 ml) centrifugacsőbe helyezik, majd egy üvegpohárba meleg vízzel (40-45°C hőmérséklet) 20-30 percre hagyják. A szérum elválasztásához a vérrögöt egy vékony üvegpálcával óvatosan a cső fala mentén húzzák körbe, és 3000 fordulat/perc sebességgel 10 percig centrifugálják.

0,12 ml szérumot gyűjtünk össze, és egy agglutinációs csőbe helyezzük, ahol ezután 0,12 ml 1 M kálium-hidroxid alkoholos oldatot adunk hozzá. A tartalmat alaposan összerázzuk.

A mintákat tartalmazó kémcsöveket 20 percre 60°C-os vízfürdőbe helyezik a hidrolízis végrehajtása érdekében.

A mintákat lehűtjük, 0,12 ml xilol-oktán elegyet adunk hozzá, és erőteljesen rázzuk 10-15 másodpercig. Ezután ismét lehűtjük és centrifugáljuk.

Az A-vitamint és karotinoidokat tartalmazó felső réteget óvatosan eltávolítják egy gumidugóval ellátott Pasteur-pipetta segítségével, és mikroküvettákba helyezik.

A mintákat 328 nm hullámhosszon spektrofotometriával határozzák meg az A-vitamin, és 460 nm hullámhosszon a karotinoidok meghatározása céljából.

Spektrofotometria után a mintákat ultraibolya sugárzásnak teszik ki az A-vitamin lebontása érdekében. Erre a célra egy kvarc (baktericid) lámpát helyeznek el a mikroküvettáktól 15-20 cm távolságra, hogy a küvetta folyadékkal töltött része sugárzásnak legyen kitéve; a besugárzási idő 45-60 perc.

A mintákat 328 nm hullámhosszon újra spektrofotometriával vizsgálják. Az A-vitamin-tartalmat az extinkciós értékek különbsége (optikai sűrűség) határozza meg, figyelembe véve a Bessey által az A-vitaminra kiszámított 637-es együtthatót (faktort).

A számítást a következő képlet szerint végezzük:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Ahol X az A-vitamin-tartalom, μg/dl; 637 a Bessey által számított együttható az A-vitamin meghatározására; E328(1) az oldat optikai sűrűsége besugárzás előtt; E328(2) az oldat optikai sűrűsége besugárzás után.

Az A-vitamin koncentrációjának µg/dl-ről µmol/l-re való átszámításának együtthatója 0,035.

A karotinoidok tartalmát a következő képlettel számítjuk ki:

X = 480-E480,

Ahol X a karotinoid-tartalom, μg/dl; 480 a Bessey által számított karotinoid-meghatározási együttható; E480 a vizsgálati oldat optikai sűrűsége.

Jegyzet

Bessey szerint a kutatás során nagyobb vagy kisebb térfogatú szérum is használható, de az alkohololdat térfogatához viszonyított arányának állandónak kell lennie a xilol-oktán keverék térfogatának (mennyiségének) bármilyen változásával.

Az A-vitamin normál tartalma a vérszérumban: újszülötteknél és csecsemőknél - 160-270 μg/l; felnőtteknél - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). A karotinoidok tartalma a felnőttek vérszérumában 800-2300 μg/l.