A cikk orvosi szakértője
Új kiadványok
A PCR mint a genetikai betegségek diagnosztizálásának módszere
Utolsó ellenőrzés: 04.07.2025
Minden iLive-tartalmat orvosi szempontból felülvizsgáltak vagy tényszerűen ellenőriznek, hogy a lehető legtöbb tényszerű pontosságot biztosítsák.
Szigorú beszerzési iránymutatásunk van, és csak a jó hírű média oldalakhoz, az akadémiai kutatóintézetekhez és, ha lehetséges, orvosilag felülvizsgált tanulmányokhoz kapcsolódik. Ne feledje, hogy a zárójelben ([1], [2] stb.) Szereplő számok ezekre a tanulmányokra kattintható linkek.
Ha úgy érzi, hogy a tartalom bármely pontatlan, elavult vagy más módon megkérdőjelezhető, jelölje ki, és nyomja meg a Ctrl + Enter billentyűt.
A PCR a molekuláris genetika új vívmánya, amelyet DNS-amplifikációra használnak, és lehetővé teszi egy adott DNS-régió (azaz bármely érdekes gén) gyors in vitro sokszorozását, több mint 200 000-szer. A reakció végrehajtásához elegendő egyetlen sejtből származó DNS-anyag; a PCR-rel amplifikált DNS mennyisége olyan nagy, hogy ez a DNS egyszerűen festhető (radioaktív próbák használata az elektroforézis után nem szükséges). A PCR végrehajtásának előfeltétele az amplifikált DNS-régió nukleotidszekvenciájának ismerete a mesterségesen szintetizált primerek helyes kiválasztásához.
Jelenleg a PCR egy egycsöves folyamat, amely egy adott DNS-molekula-szekvencia ismételt amplifikációs (reprodukciós, másolási) ciklusaiból áll, hogy kellően nagy számú, elektroforézissel azonosítható másolatot kapjanak. A reakció egyik kulcsfontosságú összetevője a „primerek” - szintetikus oligonukleotidok, amelyek 20-30 bázisból állnak, és komplementerek a mátrix DNS azonosított területén lévő anneálási (kapcsolódási) „helyekkel” (területekkel).
A PCR automatikusan megy végbe egy programozható termosztátban - egy hőciklerben (erősítőben). A háromlépcsős ciklus, amely a mátrix DNS azonosított szakaszának pontos másolatait eredményezi, 30-50-szer ismétlődik a megadott hőcikler programnak megfelelően. Az első ciklusban az oligoprimerek hibridizálnak az eredeti mátrix DNS-sel, majd (a következő ciklusokban) az újonnan szintetizált DNS-molekulákkal, ahogy azok felhalmozódnak a reakcióelegyben. Ez utóbbi esetben a DNS-szintézis nem a hőmérsékletváltozás következtében ér véget, hanem az amplifikált szakasz DNS-polimeráz határának elérésekor, amely egy nukleotid pontossággal határozza meg az újonnan szintetizált DNS-szakasz méretét.
Az elektroforézist a kapott DNS-molekulák kimutatására használják, amelynek segítségével az amplifikált anyagot az amplikonok (amplifikációs termékek) mérete szerint választják szét.
A PCR segítségével közvetlenül vizsgálhatók a feltételezett mutációk vagy polimorf helyek, valamint bármely más specifikus DNS-jellemző jelenlétét is vizsgálni lehet.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]