A sejt transzplantáció korlátai, veszélyei és szövődményei

Műanyag-regeneratív orvoslás alapja az a felismerés a klinikán és toti- tulajdonságok pluripotens embrionális őssejtek és progenitor sejtek, amely lehetővé teszi az in vitro és in vivo, hogy hozzon létre egy előre meghatározott sejtvonalak repopulációs sérült szövetek és szervek a humán páciens.

Az emberi lény terápiás célokra szolgáló végleges szöveteinek (az úgynevezett felnőtt őssejtek) embrionális őssejtjeinek és őssejtjeinek valóságos lehetősége már nem kétséges. Ugyanakkor az Egyesült Államok Nemzeti és Orvosi Akadémiái (USA) szakértői azt javasolják, hogy részletesebben tanulmányozzák a kísérleti kísérletekben a őssejtek tulajdonságait megfelelő biológiai modellekkel, és objektíven értékeli a transzplantáció összes következményét, és csak akkor használja az őssejteket a klinikában.

Megállapítottam, hogy az őssejtek mindhárom embrionális szórólap szövetszármazékának részét képezik. Őssejtek találhatók a retinában, szaruhártya, bőr, epidermisz, csontvelő és a perifériás vér, az erekben, a pépet a fog, a vese, a hám az emésztőrendszer, a hasnyálmirigy és a máj. A modern módszerek segítségével bebizonyosodott, hogy a szárat idegsejtek lokalizálódnak a felnőtt agyban és a gerincvelőben. Ezek szenzációs eredmények felkeltette különös figyelmet a tudósok és a média, mint a neuronok az agyban voltak klasszikus példája egy statikus sejt populáció nem lehet visszaállítani. Mind a korai és kései korszakában Az egyedfejlődés miatt idegi őssejtek az emberi és az állati agy által generált neuronok, asztrociták és oligodendrociták (Őssejtek: a tudományos haladás és a jövőbeni kutatási irányok Nat Inst, Egészségügyi USA ..).

Normális körülmények között azonban a végleges szövetek őssejtjeinek plaszticitása nem jelenik meg. A végleges szövetek őssejtjeinek műanyag potenciáljának megvalósítása érdekében izolálni kell őket, majd citokinek táptalaján (LIF, EGF, FGF) tenyésztve kell őket előállítani. Ezen túlmenően az őssejt-származékok csak akkor sikerült túlélni, ha egy depressziós immunrendszer (γ-besugárzás, citosztatikumok, buszulfán stb.) Testébe transzplantálták. Eddig nem volt meggyőző bizonyíték arra, hogy az őssejt-plaszticitást olyan állatoknál, amelyek nem voltak besugárzott vagy más módon nem voltak mélyen immunszuppressziónak kitéve.

Ilyen körülmények között a veszélyes potenciát PGCs nyilvánulnak elsősorban a méhen kívüli transzplantáció területén - szubkután injekció ESK immunhiányos egerekbe az injekció helyén kialakult teratokarcinóma. Továbbá, az emberi embrionális fejlődés gyakorisága kromoszóma-rendellenességek, mint az embriogenezis állatokban. A blasztocita állapotban csak 20-25% -a az emberi embriók sejtekből áll egy normális kariotípusú, és a túlnyomó többsége a korai emberi embriók kapott megtermékenyítés után in vitro, kromoszómális mozaicizmus észlelt kaotikus és nagyon gyakori numerikus és szerkezeti aberrációk.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7]

Az őssejtek előnyös hatása

A klinikai vizsgálatok előzetes eredményei megerősítik az őssejtek jótékony hatását a betegre, de eddig nincs információ a sejt transzplantáció hosszú távú következményeiről. A szakirodalomban, kezdetben domináló jelentések pozitív eredmények a transzplantáció csontvelő fragmensek az embriók a Parkinson-betegségben, de aztán kezdtek megjelenni az adatok tagadja hatásos terápiás hatását az embrionális és magzati idegszövet átültetett betegek agyában.

A közepén a XX század a helyreállítása vérképzés fedezték fel letálisan besugárzott állatok intravénás transzfúzió csontvelő sejtek, és 1969-ben az amerikai kutató D. Thomas végre az első csontvelő-transzplantáció ember. Az ismeretek hiánya a mechanizmusait immunológiai összeférhetetlenségi csontvelő donor és a recipiens, miközben nagymértékű mortalitást okozott miatt gyakori neprizhivleniya graft és fejlesztési reakció „graft-versus-host”. A felfedezés a fő hisztokompatibilitási komplex, amely áll a humán leukocita antigén (HbA), és javítása módszerek beírásával lehetővé, hogy jelentősen növeli a túlélési arány csontvelő-transzplantáció után, ami a széles körben elterjedt ez a kezelési módszer a Onkológia és Hematológia. Egy évtizeddel később, az első transzplantáció a vérképző őssejtek (HSC) végeztek, perifériás vérből leukaferézissel. 1988-ben Franciaországban kezelésére egy gyermek Fanconi anaemia forrásként HSC-ben használták először köldökzsinórvérből, és 2000 végén a sajtó kezdtek megjelenni a képességét HSC sejtté differenciálódnak különböző típusú szövetet, amely potenciálisan kiterjeszti a klinikai alkalmazás. Azonban kiderült, hogy az anyag az átültetésre, valamint GSK tartalmaz jelentős számú különböző jellegűek és tulajdonságait a szennyező nem vérképző sejtek. Ehhez kapcsolódnak az oltvány tisztítására és a sejt tisztaságának értékelésére szolgáló módszerek. Különösen használva pozitív immunszelekciós CD34 + sejtek, amely lehetővé teszi, hogy izoláljuk GCW monoklonális ellenanyagok alkalmazásával.

[8], [9], [10], [11], [12]

Az őssejtterápia szövődményei

A csontvelő-átültetés szövődményei leggyakrabban hematológiai jellegűek, és hosszú idejű iatrogén pancitopénia társulnak. A leggyakoribb fertőzések: vérszegénység, vérszegénység és vérzés. Ebben a tekintetben rendkívül fontos, hogy kiválassza a csontvelő mintavételének, feldolgozásának és tárolásának optimális módját az őssejtek maximális megőrzéséhez, ami biztosítja a hematopoiesis gyors és stabil helyreállítását. A transzplantáció jellemzésénél jelenleg elfogadják a következő paraméterek értékelését: a mononukleáris és / vagy nukleált sejtek, a kolóniaképző egységek száma és az SB34-pozitív sejtek mennyisége. Sajnos ezek a mutatók csak közvetett becsléssel szolgálnak az őssejt-transzplantációs populáció valós vérképző képességére. A mai napig teljesen pontos paraméterek vannak a transzplantátum elégségességének meghatározására a hemopoízis hosszú távú helyreállítására még autológ csontvelő-transzplantációban is. A közös kritériumok kidolgozása rendkívül nehéz a merev feldolgozási szabványok hiánya, a krioprezerváció és a graft vizsgálat miatt. Ezenkívül figyelembe kell venni azokat a tényezőket, amelyek befolyásolják a hematopoiesis sikeres visszanyerésének paramétereit minden egyes beteg esetében. A autológ csontvelő-transzplantáció a legfontosabb ezek közül a száma előtt rend, különösen a kondicionáló kezelés egy olyan időszakot, a betegség, amely előállított csontvelőben gyűjtőrendszer alkalmazása kolóniastimuláló faktorok transzplantáció utáni időszakban. Ezenkívül nem szabad megfeledkezni arról, hogy a magzati transzplantáció előtti kemoterápia negatív hatást gyakorolhat a csontvelő őssejtekre.

A súlyos toxikus szövődmények előfordulása jelentősen megnő az allogén csontvelő-transzplantációval. Ebben az összefüggésben a thalassaemiában az allogén csontvelő transzplantációjára vonatkozó statisztikai adatok érdekesek. A jelentéseket az Európai Csontvelő-transzplantációs csoport regisztrált mintegy 800 csontvelő-transzplantáció thalassaemia majorban szenvedő betegek. Allogén transzplantáció thalassaemia a legtöbb esetben elvégezhető a HLA-azonos testvér, amely kapcsolatban van a súlyos szövődmények és magasabb mortalitás a transzplantáció őssejt anyagot kapcsolódó részben kompatibilis vagy megfelelő nem rokon donorokból. Annak érdekében, hogy minimálisra csökkentsék a halálos fertőzéses komplikációk, a betegek kerülnek izolált aszeptikus dobozban lamináris áramlás, az alacsony vagy abacterial diétát. A bakteriális fertőtlenítő bél per os adagolt nerezorbtsionnye formák az antibiotikumok, gombaellenes szerek. Annak érdekében, hogy az intravénás amfotericin B megelőzése szisztémás fertőzések fix amikacinnál és ceftazidim, amelyek kijelölik a nap a transzplantáció előtt, miközben továbbra is a kezelés végzése, a beteg. Minden vérkészítményt besugárzás előtt 30 Gy adagban besugározzanak. A transzplantáció során a parenterális táplálkozás előfeltétele, és azonnal elkezdődik az élelmiszerek természetes módon történő bevitelének korlátozásával.

Számos összefüggő komplikációk magas toxicitása immunszuppresszív gyógyszerek, amelyek gyakran hányingert, hányást és nyálkahártya-gyulladás, vesekárosodás és interstitialis pneumonia. A kemoterápia egyik legsúlyosabb szövődménye a máj veno-occlusiv betegsége, ami halálhoz vezet a korai transzplantációs időszakban. Közül a kockázati tényezők a vénás trombózis, a portál rendszer a máj kell jegyezni a beteg életkora, jelenléte a hepatitis és a máj fibrózis, és a gazdaság immunszuppresszív terápia csontvelő-transzplantáció után. Venookklyuzionnaya betegség különösen veszélyes a thalassaemia, amely kíséri hemosiderosis májfibrózis és hepatitisz - gyakori műholdak transz fúziós terápia. Vénás trombózis a portál rendszer a máj belül alakul ki 1-2 hét után a transzplantáció, és jellemző a gyors növekedése a vér bilirubin és transzaminázok, progresszív hepatomegalia, ascites, encephalopathia, és a fájdalom a has felső részében. Szövettanilag boncolási anyag meghatározott endoteliális károsodás, szubendoteliális vérzés, léziók tsentrolobulyarnyh hepatociták, trombotikus elzáródás máj venulák és a központi véna. A thalassaemiában szenvedő betegeknél a citosztatikumok mérgező hatásaival összefüggő halálos szívmegállás történt.

A transzplantációra való felkészülés során a ciklofoszfamid és a buszulfán gyakran toxikus hemorrágás cystitist okoz, patológiás változásokkal az uroepitheliális sejtekben. Használata ciklosporin A csontvelő-átültetés gyakran kíséri hatásai nefrotoxicitás és neurotoxicitás, hipertenzív szindróma, folyadék-visszatartás és a citolízist hepatociták. A szexuális és reproduktív funkciók megsértése gyakrabban fordul elő a nők körében. A transzplantáció utáni kisgyermekeknél a pubertás fejlődés általában nem szenved, ám idősebb gyermekeknél a genitális gömb fejlődésének patológiája nagyon komoly lehet - a sterilitásig. A transzplantációhoz közvetlenül kapcsolódó szövődmények magukban foglalják az allogén csontvelősejtek elutasítását, az ABO rendszerben való inkompatibilitást, a "graft versus host" reakció akut és krónikus formáit.

Into a beteg a transzplantáció után ABO-kompatibilis csontvelő idioagglutinin típusú „host ellen donor ABO” belül termelt 330-605 nappal a transzplantáció után, ami oda vezethet, hogy hosszan tartó hemolízist és erőteljes növekedése a vérátömlesztés szükségességének. Az említett szövődmény megakadályozható transzfúziójával eritrociták csoportok csak 0. Transzplantáció után számos betegnél az autoimmun neutropenia, thrombocytopenia, pancytopenia, vagy, a korrekciót, amely kell végrehajtani lépeltávolítás.

A 35-40% részesítettek akut reakció „graft-versus-host” alakul ki 100 napon belül transzplantációja után allogén hemoglobin-azonos csontvelő. A mértéke bőrsérülések, a máj és a belek között változik kiütés, hiperbilirubinémiát, hasmenés és enyhe bőr hámlással, bélelzáródás, akut májelégtelenség. A betegek thalassaemia jelentése akut reakció „graft-versus-host” I mértékben csontvelő-átültetés után 75%, a II és a magasabb mértékben - 11-53%. Krónikus reakció „graft-versus-host”, mint egy szisztémás többszervi szindróma általában fejlődik belül 100-500 nappal a transzplantáció után a allogén csontvelőt 30-50% -ánál. A bőr, a száj, a máj, a szem, a nyelőcső és a felső légúti betegség érintett. Különböztesse korlátozott formában krónikus reakció „graft versus host”, amikor az érintett bőr és / vagy a máj, és a széles körben elterjedt, generalizált bőrelváltozások kombinálva krónikus agresszív hepatitis, szembetegség, nyálmirigyek, vagy bármely más szerv. A halál oka gyakran a súlyos immunhiányos betegség okozta fertőző komplikációk. Thalessaemiás krónikus enyhe formája a reakció „graft-versus-host” találtak 12%, közepes - 3%, és súlyos - van 0,9% részesítettek HLA-kompatibilis allogén csontvelő. A csontvelő-átültetés súlyos szövődménye a transzplantációs kilökődés, amely a műtét után 50-130 nappal alakul ki. Az elutasítási frekvencia a kondicionálási módtól függ. Különösen azok a betegek thalassaemia kezelt előkészítése során a metotrexát, elutasítása csontvelő graft megfigyelhető 26% -ában, kombinációi metotrexát ciklosporin A-val - 9%, és amikor kiosztása csak a ciklosporin A - 8% -ában (Haziyev stb ., 1995).

Fertőzéses szövődmények transzplantáció után a csontvelő által okozott vírusok, baktériumok és gombák. Fejlődésük csatlakozik mély neutropénia, amely kiváltotta a kemoterápia során kondicionálás, citosztatikumok legyőzni nyálkahártya akadályok és reakció „graft versus host”. Attól függően, hogy az idő a fejlesztés, három fázisban a fertőzés. Az első fázisban (fejlődő az első hónapban transzplantáció utáni) uralja kárt a nyálkahártya barrier és a neutropenia, gyakran kíséri vírusfertőzések (herpes, Epstein-Barr-vírus, Cytomegalovírus, Varicella zoster), valamint a fertőzések által okozott grampolozhi - gyulladásos és Gram-negatív baktériumok, Candida gombákkal , aspergillómák. A transzplantáció utáni korai időszakban (a második és harmadik hónapban a transzplantáció után) a legsúlyosabb CMV fertőzés, ami gyakran vezet a betegek halálához, a második szakaszban a fertőzés. Thalassemia citomegalovírus fertőzés után csontvelő-transzplantációt előfordul 1,7-4,4% -a kapta. A harmadik szakasz figyelhető meg a transzplantáció utáni késői periódusban (három hónappal a műtét után), és jellemző a súlyos kombinált immunhiányos. Ez az időszak általában megtalálható okozta fertőzések A varicella zoster, streptococcus, Pneumocystis Carini, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae és hepatotropikus vírusok. Thalassaemia betegek mortalitását csontvelő-transzplantáció után társul bakteriális és gombás szepszist, idiopátiás intersticiális és citomegalovírus tüdőgyulladás, akut légzési distressz szindróma, akut szívelégtelenség, szívtamponád, agyvérzés, venookklyuzionnoy májbetegség és akut reakció „graft-versus-host”.

Jelenleg bizonyos előrehaladás történt a csontvelőből a csontvelő hemopoetikus sejtek tiszta populációjának izolálására szolgáló módszerek kidolgozásában. A köldökzsinórtól származó magzati vért előállító technika javult, és módszereket dolgoztak ki a vérből kialakuló sejtek cordvérből történő izolálására. A tudományos sajtóban beszámoltak arról, hogy ha a citokinekben médiában tenyésztik, a hematopoietikus őssejtek képesek szorzásra. Ha speciálisan tervezett bioreaktort alkalmazunk a HSC terjeszkedéséhez, a csontvelőből, a perifériás vagy a köldökvérből izolált szárat hemopoetikus sejtek biomasszája jelentősen megnő. A HSC kiterjesztésének lehetősége fontos lépés a sejt transzplantáció klinikai fejlődésében.

Mindazonáltal a HSC in vitro reprodukálása előtt szükség van a hematopoietikus őssejtek homogén populációjának izolálására. Ezt általában segítségével markerek, amely lehetővé teszi, hogy szelektíven megjelölni HSC monoklonális antitestek kovalensen kötött mágneses vagy fluoreszcens jelölést, és válassza ki őket egy alkalmas sejtosztályozóval. Ugyanakkor a hematopoietikus őssejtek fenotípusos jellemzőinek kérdését nem sikerült véglegesen megoldani. A. Petrenko., V. Hryschenko (2003), mint jelöltek GSK kezelt sejtek, amelyek jelen vannak a felszínen CD34, AC133 és Thyl antigének és nem CD38, HLA-DR és más markerek differenciálódási (sejtek fenotípusának CD34 + LIIR). A lineáris differenciálódási markerek (lineage, Lin) közé glikoforin (GPA), CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20 (Muench, 2001). Ígéretes transzplantációhoz a sejtek fenotípusának CD34 + CD45RalüW CD71low, valamint a CD34 + Thyl + CD38low / c-kit / alacsony.

A HSC-k száma, amelyek elegendőek a hatékony transzplantációhoz, továbbra is problémát jelent. Jelenleg a szárat vérformáló sejtek forrása a csontvelő, perifériás és zsinórvér, valamint az embrionális máj. A kórokozó hemopoietikus sejtek növekedését úgy érjük el, hogy tenyésztjük őket endothelociták és hematopoietikus növekedési faktorok jelenlétében. Különböző protokollokban a HSC proliferációjának kiváltására myeloproteinek, SCF, eritropoetin, inzulinszerű növekedési faktorok, kortikoszteroidok és ösztrogének alkalmazhatók. Ha a citokinek kombinációit in vitro használják, akkor a HSC-pool jelentős növekedése érhető el a második héten a felszabadulás csúcsával.

Hagyományosan a HSC köldökvért elsősorban a hemoblasztózisokban használják. A sebészeti beültetéshez szükséges hematopoetikus sejtek minimális dózisa azonban 3,7 x 10 ⁷ nucleated sejt a recipiens 1 kg testtömegére számítva. A kisebb mennyiségű HSC alkalmazása jelentősen növeli a graft kudarc kockázatát és a betegség visszaesését. Ezért a köldökzsinórvér vérformáló sejtjeinek átültetését főként a hemoblastosis gyermekek kezelésében alkalmazzák.

Sajnos még mindig nincs szabvány üres, és szabványos protokollok klinikai alkalmazása köldökzsinórvér vérképző sejtek. Ennek megfelelően maguk őssejteket köldökzsinórvérből jogilag nem elismert, mint a forrás a vérképző őssejtek transzplantációra. Ezen kívül nincs etikai vagy jogi tevékenységek szabályairól és szervezeti bankok köldökzsinór krovb, hogy rendelkezésre állnak külföldön. Közben a biztonsági transzplantációja köldökzsinórvérből, az összes mintát gondosan ellenőrizni kell. Mielőtt vérmintát gyűjtene egy terhes nőből, beleegyezését meg kell szereznie. Minden terhes kell vizsgálni egy kocsira HBsAg, antitestek a hepatitis C vírus, a HIV és a szifilisz. Minden mintát a köldökzsinórvér tesztelni kell a szabvány számát magvas sejtek és a CD34 + telepképző képességét. Továbbá HbA végzett gépelés, ABO vércsoport és tagságát az Rh faktor. Vizsgálati eljárások szükségesek Crop bakteriológiai sterilitás, szerológiai vizsgálat a HIV-1 és HIV-2 fertőzés, HBsAg, a hepatitis C-vírus, citomegalovírus fertőzés, ntly ntly-1 és a-II, szifilisz, toxoplazmózis. Ezen túlmenően, a kimutatására citomegalovírus és a HIV-polimeráz láncreakciót hajtjuk végre. Célszerűnek tűnik, hogy kiegészítse a elemzését protokollok tesztelés köldökvér HSC-k azonosítására ilyen genetikai betegségek, mint a thalassaemia és sarlósejtes vérszegénység, adenozin-deamináz-hiány, agammaglobulinémia Bruton, betegség Harlera és fogadók számára.

A transzplantáció előkészítésének következő szakaszában a GSK megőrzésével kapcsolatos kérdés merül fel. A sejtek életképességének legveszélyesebb a fagyasztási és felengedési eljárások során. A hemopoietikus sejtek fagyasztásakor a kristályképződés miatt jelentős része megsemmisíthető. A sejthalál százalékának csökkentése érdekében speciális anyagokat használnak - a krioprotektánsok. Leggyakrabban krioprotektánsként DMSO-t használunk 10% végső koncentrációban. DMSO esetében azonban ez a koncentráció közvetlen citotoxikus hatással jellemezhető, amely még minimális expozíció esetén is megnyilvánul. A citotoxikus hatás csökkentése az expozíciós mód nullázott hőmérsékletének szigorú fenntartásával, valamint az anyag feldolgozásának és a leolvasztás utáni eljárásnak (az összes manipuláció sebessége, újrafelhasználható mosási eljárások alkalmazása) tiszteletben tartásával érhető el. Ne alkalmazzon 5% -nál kevesebb DMSO-koncentrációt, mivel ebben az esetben a hemopoetikus sejtek tömeghalálozása a fagyási időszak alatt történik.

A vörösvérsejt-szennyeződések jelenléte a GSK szuszpenziós keverékben az eritrocita antigének összeférhetetlenségének kialakulásának veszélyével jár. Ugyanakkor, a vörösvérsejtek eltávolításával jelentősen megnő a hematopoietikus sejtek vesztése. Ezzel összefüggésben a GSK frakcionált izolálására vonatkozó eljárást javasoltak. Ebben az esetben, hogy megvédje a magvas sejtek a káros hatásai az alacsony hőmérsékletek alkalmazásával 10% -os DMSO-oldatban, és hűtés közben olyan állandó sebességgel (HS / perc) -80 ° C hőmérsékleten, majd a sejt szuszpenziót folyékony nitrogénben lefagyasztottuk. Úgy véljük, hogy ezzel a krioprezerváló technikával a vörösvérsejtek részleges lízisére kerül sor, ezért a vérminták nem igényelnek frakcionálást. A transzplantáció előtt a sejtszuszpenziót felengedjük, hemoglobinnal és DMSO-val mentesítjük emberi albumin vagy szérum oldatban. Megőrzése progenitor ezzel a módszerrel valóban követyoen köldökzsinórvér végezzük, de a veszély a komplikációk miatt a transzfúzió ABO-inkompatibilis transzfúzió a vörösvértest tárolják.

A HSC-tesztelés és a HSC-minták tárolására szolgáló bankrendszerek létrehozása megoldhatja a fenti problémákat. Ehhez azonban erkölcsi és jogi normákat kell kidolgozni, amelyek még mindig csak megvitatásra kerülnek. Egy bankhálózat létrehozása előtt számos rendelkezést és dokumentumot kell elfogadni a mintavétel, a frakcionálás, a tesztelés és a gépírás, valamint a GCW kriokonfigurációjának szabványosítása tekintetében. Ennek előfeltétele a hatékony tevékenység a bankok A GSK a szervezet számítógépes adatbázisok a kapcsolatot a donor csontvelő regisztrálja World Association (WMDA) és az Országos donor csontvelő, az Egyesült Államok Program (NMDP).

Ezenkívül szükséges a HSC-terápia in vitro, elsősorban vérvörösvérsejt-vérsejtek módszereinek optimalizálása és szabványosítása. A HSC-vérek sokszorosítása szükséges a HLA-rendszerrel kompatibilis potenciális címzettek számának növeléséhez. Kis mennyiségű köldökvér miatt a benne lévő HSC mennyisége általában nem képes csontvelő repopulációra felnőtt betegeknél. Ugyanakkor a nem kapcsolódó transzplantációk lefolytatásához elegendő számú tipikus GSK mintát kell elérni (10 000-ről 1 500 000-re a címzettenként).

A szárat hemopoetikus sejtek transzplantációja nem szünteti meg a csontvelő-átültetést kísérő szövődményeket. Az elemzés szerint a köldökzsinórvér őssejtek transzplantációjában az akut "graft-versus-host" reakció súlyos formái 23% -ban fejlődnek, krónikusak a recipiensek 25% -ában. Az oncohematológiai betegeknél az akut leukémia ismétlődése a HSC-vértelepülés első évében az esetek 26% -ában megfigyelhető.

Az elmúlt években a perifériás hematopoietikus őssejtek transzplantációjának módszerei intenzíven fejlődtek. A HSC tartalma a perifériás vérben olyan kicsi (100 000 vérsejtenként 1 GSK), hogy a külön készítmény nélküli izolálásnak nincs értelme. Ezért a donor számára korábban a vérképző csontvelősejtek vérben történő felszabadulásának gyógyszeres stimulációját adják. E célból olyan, ártalmatlan gyógyszereket alkalmaznak, mint a ciklofoszfamid és a granulocita kolónia-stimuláló faktor. De még a perifériás vérben a HSC mobilizálására irányuló eljárás után sem, a CD34 + sejtek tartalma nem haladja meg az 1,6% -ot.

A HSC mobilizálására a klinikánál gyakrabban alkalmazzák a C-CEC-et, amelyet viszonylag jó tolerálhatóság jellemez, kivéve a fájdalom szinte rendszeres megjelenését a csontokban. Meg kell jegyeznünk, hogy a modern vérelválasztók használata lehetővé teszi számunkra, hogy hatékonyan izoláljuk a hematopoiesis szárának progenitorjait. Normális vérképzés esetén azonban legalább 6 eljárást kell végezni ahhoz, hogy elegendő számú hematopoietikus őssejtet kapjunk, ami összehasonlítható a csontvelő-szuszpenzió repopulatív kapacitásával. Mindegyik ilyen eljárás során az elválasztó 10-12 liter vért dolgoz fel, amely trombocitopéniát és leukopeniát okozhat. Az elválasztási eljárás egy antikoaguláns (nátrium-citrát) adagolását jelenti a donor számára, amely azonban nem zárja ki a vérlemezkék aktiválódását az extracorporalis centrifugálás során. Ezek a tényezők megteremtik a feltételeket a fertőző és vérzéses szövődmények kialakulásához. A módszer másik hátránya abban rejlik, hogy a mobilizációs válasz jelentős változékonysága megköveteli a HSC perifériális véradókban lévő tartalma ellenőrzését, ami szükséges a maximális szint meghatározásához.

A HSC autológ transzplantációja, ellentétben az allogénnel, teljesen kizárja az elutasítási reakció kialakulását. Ugyanakkor jelentős hátránya autológ transzplantáció a vérképző őssejtek, korlátozza a tartományban indikációi magatartása, nagy a valószínűsége, reinfusion sejt leukémiás klón transzplantáció. Ezenkívül az immuno-mediált "graft-versus-tumor" hatás hiánya jelentősen megnöveli a malignus vérbetegségek rekurrenciáinak gyakoriságát. Ezért az egyetlen módja a radikális megszüntetése klonális vérképzési daganatos és visszaállítani a normál poliklonális hemaiopoiezis myelodysplasiás szindrómák intenzív kemoterápiát allogén transzplantáció HSC.

De még ebben az esetben is a legtöbb hemoblasztózis kezelésére csak a betegek túlélési idejének növelésére és az életminőség javítására irányulnak. Számos nagy tanulmány szerint a HSC allotranszplantáció után az endotoxikus betegek 40% -ában elhúzódó betegségmentes túlélés érhető el. Amikor egy őssejt hemoglobin-azonos testvér legjobb eredmények láthatók a fiatalabb betegeknél rövid története a betegség, annál több a leukémiás sejtek 10% -át, és kedvező citogenetikai. Sajnálatos módon a myelodysplasticis betegeknél a HSC allotranszplantációs eljárással kapcsolatos mortalitás továbbra is magas (a legtöbb riportban - kb. 40%). Az eredmények 10 éves szakmai USA Nemzeti Program csontvelő adományt (510 beteg a medián életkor - 38 éves) azt jelzi, hogy a betegségmentes túlélés 29% két éven belül egy viszonylag alacsony a valószínűsége a visszaesés (14%). Azonban a GSC allotranszplantáció eljárásából eredő halálozás nem társított donorból rendkívül magas, és két év alatt 54% -ot ér el. Hasonló eredményeket kaptak az európai vizsgálatban (118 beteg, 24 éves medián, 2 éves relapszusmentes túlélés 28%, ismétlődés 35%, mortalitás 58%).

Intenzív kemoterápiás eljárások során, amelyek az allogén hemopoetikus sejtek hemopoetézis utáni helyreállításával járnak, immunohematológiai és transzfúziós szövődmények gyakran előfordulnak. Sok szempontból kapcsolódnak ahhoz a tényhez, hogy az emberekben a vércsoportok az MHC-molekuláktól függetlenül öröklődnek. Ezért, még akkor is, ha az adományozó és a recipiens kompatibilis a fő HLA antigénekkel, eritrociták eltérő fenotípussal rendelkezhetnek. Kiosztani „nagy” inkompatibilitás, amikor preexist a recipiens antitest antigének donor vörösvérsejtek, és a „kis”, amikor a donor ellenanyagok antigének a vörösvértestek a recipiens. Vannak esetek a "nagy" és "kicsi" összeférhetetlenségek kombinációjáról.

Az eredmények Az összehasonlító elemzés a klinikai hatékonyságát csontvelő és a hematopoietikus őssejtek a köldökvér allograftok a hematológiai rosszindulatú betegségek azt jelzik, hogy a gyermekek allotranszplantációs GSK köldökzsinórvér szignifikánsan csökkentette a reakció kockázata „graft-versus-host”, de van egy hosszabb hasznosítási történő neutrofil és vérlemezke a 100 napos transzplantációs mortalitás gyakoribb gyakorisága.

A korai letalitás okainak tanulmányozása lehetővé tette a GSK allogén transzplantációjának ellenjavallatainak tisztázását, amelyek közül a legfontosabb:

• jelenlét a recipiensben vagy a citomegalovírus fertőzés pozitív tesztjeinek donorai (megelőző kezelés nélkül);
• akut sugárbetegség;
• jelenléte vagy akár gyanúja a mycoticus fertőzésnek a betegben való jelenlétére (szisztémás korai profilaxis nélkül fungicid hatóanyagokkal);
• hemoblasztózisok, amelyekben a betegek citosztatikumokkal hosszabb ideig tartó kezelést kaptak (a hirtelen szívbetegség és a többszörös szervi elégtelenség nagy valószínűsége miatt);
• transzplantáció a HLA-nem azonos donoroktól (anélkül, hogy megakadályoznák a ciklosporin A akut "transzplantációját");
• krónikus vírusos hepatitis C (a máj veno-occlusiv betegségének kialakulásának magas kockázata miatt).

Így a GSK-transzplantáció súlyos szövődményeket okozhat, amelyek gyakran halálhoz vezetnek. A korai (akár 100 napig a transzplantáció után) időszakban ezek közé tartoznak a fertőzéses szövődmények, akut reakció „graft versus host”, transzplantátum kilökődés (neprizhivlenie HSC donor), venookklyuzionnaya májbetegség, valamint miatt a kondicionáló kezelés toxicitását, szöveti károsodás, amelyre a magas jellemző az arány a átalakítás (bőr, vaszkuláris endotélium, bél epitélium). Szövődményei transzplantáció utáni késői időszakban közé tartozik a krónikus reakciója „graft-versus-host” ismétlődési az alapbetegség, gyermekeknél a növekedés visszamaradása, csökkent a reproduktív funkciót és pajzsmirigy szem betegség.

A közelmúltban a csontvelő-sejtek plaszticitásáról szóló publikációk megjelenésével összefüggésben felmerült a GSK alkalmazásának gondolata szívrohamok és egyéb betegségek kezelésére. Bár az állatokon végzett kísérletek is támogatják ezt a lehetőséget, meg kell erősíteni a csontvelősejtek plaszticitására vonatkozó következtetéseket. Ezt a körülményt figyelembe kell venni azoknak a kutatóknak, akik úgy vélik, hogy az emberi csontvelő átültetett sejtjei könnyen transzformálódnak a vázizomzat, a szívizom vagy a központi idegrendszer sejtjeibe. Az a hipotézis, hogy a GSK-k a szervek regenerálódásának természetes sejtforrásai, komoly bizonyítékot igényelnek.

Különösen közzétette az első eredményeit egy nyílt, randomizált vizsgálatban Belenkova V. (2003), melynek célja -, hogy tanulmányozza a hatását a C-SIS (vagyis mozgósítása autológ vér HSC) a klinikai, hemodinamikai és neurohumorális állapotát betegek közepesen súlyos krónikus szívelégtelenség, valamint a biztonsági minősítésének standard terápiával (ACE-gátlók, béta-blokkolók, diuretikumok, szívglikozidok). Az első közzététel a kutatás eredményei program szerzők megjegyzik, hogy az egyetlen érv a O-CBP vannak az eredmények kezelésére egy betegnél, aki a kezelés során, ez a gyógyszer talált vitathatatlan javulás, a klinikai és hemodinamikai paramétereket. Azonban az elmélet a HSC mozgósítás a véráramba, majd regenerációját a szívizom infarktus utáni terület még nem erősítették meg - még ha a beteg pozitív klinikai dinamika stressz echokardiográfia dobutaminnal nem mutattak a megjelenése az életképes szívizom a heg területén a területen.

Meg kell jegyezni, hogy a jelenlegi adatok pont ajánlani egy csere-sejt terápia széleskörű bevezetése a mindennapi klinikai gyakorlatban, ez nem elég. Egy jól kialakított és minőségi teljesítmény a klinikai vizsgálatok hatékonyságának meghatározására a különböző lehetőségek a regeneratív sejtterápia, a fejlesztés a jelzések és ellenjavallatok hozzá, valamint irányelvek a kombinált használata regeneratív és műanyag terápia és a hagyományos sebészi vagy konzervatív kezelés. Eddig nem érkezett válasz arra a kérdésre, hogy milyen a lakosság csontvelő sejtek (vérképző őssejt vagy stroma) adhat okot, hogy a neuronok és a szívizomsejtek és nem világos, hogy milyen feltételek hozzájárulnak ehhez in vivo.

A munka ezeken a területeken számos országban valósul meg. Az összefoglaló a szimpóziumon akut májelégtelenség az amerikai National Institutes of Health között ígéretes kezelési módszereket, valamint a májátültetés, transzplantációs jelölt xenon vagy allogén májsejtek és in vitro bioreaktorok kapcsolatban a májsejtekben. Közvetlen bizonyíték van arra, hogy csak a külföldi, funkcionálisan aktív májsejtek képesek hatékonyan támogatni a befogadó máját. Az izolált májsejtek klinikai használatához szükség van egy sejtbank létrehozására, amely jelentősen csökkenti a sejtek felszabadulása és felhasználása közötti időt. Az elszigetelt májsejtek bankjának kialakításához a leginkább elfogadható a májsejtek folyékony nitrogénben történő krioprezervációja. Az ilyen sejtek a klinikán a betegek akut és krónikus májbetegség kiderült elegendően magas terápiás hatást.

Annak ellenére, hogy optimista és biztató eredményeket transzplantációs májsejtek kísérletben és klinika, még mindig sok problémát kell még messze nem megoldott. Ezek közé tartozik a korlátozott mennyiségű alkalmas szervek, így izolált hepatociták nem elég hatékony elválasztási eljárásokkal, a hiányzó szabványosított a tartósítási eljárásokkal májsejtek fuzzy megértése a szabályozási mechanizmust a növekedését és szaporodását a transzplantált sejtek, a nem megfelelő módszerek megtapadás értékelésére vagy elutasításáról allogén hepatociták. Ez azt is tartalmaznia kell a jelenléte transzplantáció immunitást allogén vagy xenogén sejtek, bár kevésbé, mint a ortotopikus májátültetés, de alkalmazását igénylő immunszuppresszív szerek, kapszulázó izolált hepatocitákat vagy speciális feldolgozási enzimek. Transzplantációs májsejtek gyakran vezet az immunrendszer közötti konfliktusok recipiens és a donor egy kilökődési reakció, amely előírja a használatát citosztatikumok. Az egyik megoldás erre a problémára az, hogy az a polimer mikroporózus médiát, hogy izoláljuk a májsejtek, amely javítja a túlélést, mivel a kapszula membrán hatékonyan védi a hepatociták, annak ellenére, hogy a fogadó immunizálás.

Azonban az akut májelégtelenségben mint májsejt transzplantáció nincs hatása, mivel a meglehetősen hosszú idő szükséges megtapadását májsejtek az új környezetben való hozzáférést egy lépéssel optimális működéséhez. Egy lehetséges korlátozás a váladék az epe ektopikus transzplantáció az izolált hepatociták, és használata esetén bioreaktorok alapvető élettani gáton jár fajok közötti eltérés a humán fehérjék és a proteineket, amelyek xenogén hepatociták.

A szakirodalomban vannak olyan jelentések, hogy a helyi transzplantációs csontveloi őssejtek megkönnyíti a hatékony korrekciója csontdefektusok, és a csont helyreállítása ebben az esetben sokkal intenzívebb, mint a spontán reparatív regeneráció. Számos preklinikai vizsgálatok állatkísérletekben már meggyőzően igazolták a lehetőségét, hogy a transzplantáció csontvelősztrómasejtek ortopédia, bár optimalizálni ezeket a módszereket, még a legegyszerűbb esetekben további munkára van szükség. Különösen az oszteogén stromális sejtek ex vivo expanziójának optimális körülményeit még nem találtuk meg, az ideális hordozójuk (mátrix) szerkezete és összetétele még mindig nem működik. Az ömlesztett csontregenerációhoz szükséges minimális számú sejt nem határozható meg.

Bebizonyosodott, hogy a mesenchymalis őssejtek mutatnak transgermalnuyu plaszticitás - képes differenciálódni sejttípusok fenotípus nem kapcsolódnak az eredeti sejtvonal. Optimális körülmények között a poliklonális őssejt sejtvonaltenyészetében csontvelő stromasejtek in vitro fenntartott több mint 50 osztályok, amely lehetővé teszi, hogy megkapja a több milliárd stromális sejtjeinek 1 ml leszívott csontvelő. Azonban, a lakosság mesenchymális őssejtek jellemzi heterogenitás, amely megnyilvánul, mint variabilitás kolónia méretű, különböző sebességgel kialakulása és morfológiai sokféleségét sejttípusok - származó fibroblaszt-szerű orsó alakú nagy sík sejtek. 3 héten belül a tenyésztés stroma őssejtek megfigyelt fenotípusos heterogenitása: egy telepképző csomók a csontszövet, míg mások - klaszterek adipociták, és más, több ritka, alkotó szigetek a porc.

A központi idegrendszer degeneratív betegségeinek kezelésére először alkalmazták az embrió idegszövet transzplantációját. Az elmúlt években, ahelyett, hogy a magzati agy szövet transzplantátum acél sejtes elemek neuorsphere származó idegrendszeri őssejtek (.Poltavtseva, 2001). Neuorsphere tartalmaznak elkötelezett prekurzorok neuronok és a gliasejtek - ez ad reményt a helyreállítása az elveszett agyműködés transzplantáció után. Transzplantációja után sejtek neuorsphere diszpergált patkány corpus striatum agyi test jelölt azok proliferációját és differenciálódását dopaminerg neuronok, amely megszünteti a motoros aszimmetria patkányokban kísérleti gemiparkinsonizmom. Bizonyos esetekben azonban a neuroszféra sejtjeiből fejlődött ki a tumorsejt, amely állatok halálához vezetett (Bjorklund, 2002).

A klinika gondos tanulmányozása két betegcsoport amelyben sem a betegek, sem az orvosok tudják nézni őket (kettős-vak), hogy az egyik betegcsoport transzplantált embrionális szövetet idegsejtek dopamint termelő, a második csoport a betegek valótlan lépésben adta váratlan eredmények . Az embrionális idegszövetben átültetett betegek nem voltak jobbak, mint a kontroll csoport betegei. Továbbá 5 33 beteg közül 2 év után a transzplantáció után embrionális idegszövet fejlett kitartó mozgászavar, amely nem volt kontroll betegcsoport (Őssejtek: a tudományos haladás és a jövőbeni kutatási irányok Nat Inst, Egészségügyi USA ...). Az egyik megoldatlan problémája a klinikai vizsgálatok az agy idegi őssejtek az elemzést a valós kilátások és korlátait származékaik transzplantáció korrekciójára központi idegrendszeri rendellenességek. Lehetséges, hogy az elhúzódó roham aktivitást indukált neyronogenez a hippocampusban, ami annak strukturális és funkcionális változások tényező lehet a fokozatos fejlődése az epilepszia. Ez a következtetés különösen figyelemre méltó, mert rámutat a lehetséges negatív hatásait az új generációs idegsejtek a felnőtt agyban, és megalakult a rendellenes szinaptikus kapcsolatok.

Nem szabad elfelejteni, hogy a termesztőközeg a citokinek (mitogének) megközelíti a jellemzőit őssejtek, hogy a tumorsejtek előforduló közel szabályozásában változtatásokat a sejt ciklusok meghatározására képes osztódni. Bolond, hogy átültetik az embereket az embrionális őssejtek korai származékaira, mivel ebben az esetben a malignus daganatok kialakulásának fenyegetése nagyon nagy. Sokkal biztonságosabb az elkövetett utódaik használata, azaz a differenciált vonalak prekurzorsejtjei. Jelenleg azonban még nem dolgoztak ki megbízható technikát a stabil irányba megkülönböztető, stabil humán sejtvonalak előállításához.

A molekuláris biológiai technológiák használata az örökletes patológiák és az emberi betegségek kijavítására az őssejtmódosítás segítségével nagy jelentőséget tulajdonít a gyakorlati orvoslásnak. Az őssejt genomjainak jellemzői lehetővé teszik az egyedülálló transzplantációs rendszerek kifejlesztését a genetikai betegségek kijavítása céljából. De ebben az irányban számos olyan korlát van, amelyet felül kell küszöbölni, mielőtt az őssejtek genetikai konstrukciójának gyakorlati alkalmazása megkezdődik. Mindenekelőtt az őssejt genom módosításának ex vivo módszert kell optimalizálnia. Ismeretes, hogy az őssejtek meghosszabbodott (3-4 hetes) proliferációja csökkenti a transzfekciót, így több transzfekciós ciklus szükséges a genetikai módosításuk magas szintjének eléréséhez. A fő probléma azonban a terápiás gén expressziójának időtartamával függ össze. Eddig egyetlen vizsgálatban sem a módosított sejtek transzplantációja utáni hatékony expressziós időszak nem haladta meg a négy hónapot. Az esetek 100% -ában idővel a transzfektált gének expressziója csökken a promoterek inaktiválásának és / vagy a módosított genomú sejtek halálának következtében.

Fontos probléma a sejttechnológiák használatának költsége az orvostudományban. Például a csontvelő-átültetés klinikai kiadásainak becsült éves finanszírozási igénye, amely évente 50 transzplantáció elvégzésére szolgál, körülbelül 900 000 dollár.

A sejttechnológiák kifejlesztése a klinikai orvostudományban egy komplex és többlépcsős folyamat, amely magában foglalja a multidiszciplináris tudományos és klinikai központok és a nemzetközi közösség konstruktív együttműködését. Ugyanakkor különös figyelmet fordítanak a sejtterápiás kutatás tudományos szervezetére. Ezek közül a legfontosabbak a klinikai vizsgálatok protokolljainak kidolgozása, a klinikai adatok érvényességének figyelemmel kísérése, nemzeti kutatási nyilvántartás kialakítása, multicentrikus klinikai vizsgálatok nemzetközi programjainak integrálása és az eredmények klinikai gyakorlatba való bevezetése.

Záró bevezetőjében transzplantáció kérdéseket szeretném kifejezni a reményben, hogy a közös erőfeszítések vezető szakemberei Ukrajna különböző tudományterületeken biztosítja jelentős előrelépést kísérletes és klinikai vizsgálatok, és lehetővé teszi az elkövetkező években olyan hatékony, hogy segítsen a súlyosan beteg ember szorul szervátültetés , szövetek és sejtek.

[13], [14], [15], [16], [17], [18]