A tojássárgája hematopoetikus őssejtjei

Nyilvánvaló, hogy a különböző proliferációs és a vérképző őssejt potencia sajátosságaiból adódóan az ontogenetikus fejlődés, mert a folyamat egyedfejlődés emberi változás még a lokalizáció a fő területei vérképzésre. A magzat sárgáját tartalmazó vérképzőcsatornából származó hematopoietikus progenitor sejtek kizárólagosan eritropoetikus sejtvonalat képeznek. Miután a primer GSK migrációja a májra és a lépre ezen szervek mikrokörnyezetében, a tételsorok spektruma bővül. Különösen a hematopoietikus őssejtek képesek nyirokcsomó láncokat létrehozni. A prenatális periódusban a hematopoietikus prekurzor sejtek elérik a végső lokalizáció zónáját, és kolonizálják a csontvelőt. A magzat fejlődésének folyamata a magzat vérében jelentős számú őssejt-vérképző sejtet tartalmaz. Például a terhesség 13. Hetében a HSC szint eléri a mononukleáris sejtek összes számának 18% -át. A jövőben fokozatosan csökken a tartalma, de még a születés előtt is, a köldökzsinórvérben a HSC mennyisége kis mértékben különbözik a csontvelőben lévők számától.

Szerint a klasszikus ötletek, természetes változás a lokalizációs vérképzés embrionális fejlődés során az emlősök végzi a migráció és végrehajtása új mikrokörnyezet pluripotens vérképzési őssejtek - a szikhólyag a máj, a lép és a csontvelő. Mivel a korai szakaszában az embrionális fejlődés során a hematopoietikus szövet tartalmaz nagyszámú őssejtek, ami csökkenti ahogy a terhesség, a legígéretesebb megszerzésére hematopoietikus őssejtek tartják hematopoetikus magzati májszövet izolált abortnogo anyag 5-8 hetes terhesség.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

A hematopoietikus őssejtek eredete

Az a tény, hogy a magzati vörösvérsejt termelést származik a vérben szigetek peteburkában, nem kétséges. Azonban, az in vitro hatása a vérképződési x peteburkok sejtek nagyon korlátozott (differenciálódnak túlnyomórészt eritrociták). Meg kell jegyezni, hogy a transzplantáció a vérképző őssejtek peteburkában nem képes helyreállítani a vérképzés sokáig. Kiderült, hogy nem ezek a sejtek prekurzorok felnőtt HSC. Igaz GSK korábban megjelennek, 3-5 hetes magzati fejlődés, a zóna kialakulását gyomor szövetet és az endothelium a véredények (paraaorticus splanchnopleura, P-SP), és helyére könyvjelzők aorta gonád és elsődleges vese - a területen, vagy úgy mesonephros az úgynevezett AGM-terület. Kimutatták, hogy az olyan sejtek AGM-régió nem csak egy HSC-forrás, de endoteliális sejtek az erek, és az oszteoklasztok, a folyamatok a csontképződést. A 6. Héten a terhesség korai vérképzési sejtek AGM-járásban utazik a májat, amely a fő vérképző szervek a magzat születés előtt.

Mivel ebben a kérdésben rendkívül fontos a transzplantáció, a probléma eredetének HSC az embrionális emberi érdemel részletesebb bemutatása. A klasszikus elképzelés, hogy a vérképzési őssejtek emlősök és madarak származó függelékstruktúrák forrás kutatások alapján Metcalf és Moore, aki először használt klónozási technikákkal GSK és utódaik izolált peteburkában. A munkájuk eredményét képezte az alapját a migrációs elméletet, amely szerint a GSK, először az peteburkában következetesen foglalják átmeneti és végleges a vérképző szervek alakulás folyamatában saját mikrokörnyezet. Így alakult ki a nézet, miszerint a GSK generációja, amely eredetileg a tojássárban lokalizálódott, a végleges vérképzés celluláris alapja.

Vérképzési sejtek peteburkában közül a leginkább a korai vérképzési sejteket. A fenotípust az AA4.1 + CD34 + c-kit + képlettel írjuk le. Ellentétben a HSC-k érett csontvelő, amelyek nem expresszálnak a Sca-1 antigének és MHC-molekula. Úgy tűnik, hogy a megjelenése marker felületén antigének membránok GSK peteburkok tenyésztésével megfelel a differenciálódás az embrionális fejlődés során képződése elkövetett vonalak hemopoesis: csökkenti az expresszió szintjét CD34 antigént és Thy-1 expressziót fokozó CD38 és CD45RA, jelennek meg a HLA-DR-molekulák. Az ezt követő által indukált citokinek és növekedési faktorok, in vitro expressziója szakirányú kezdődik specifikus antigének hematopoietikus progenitor sejtek az adott sejtvonal. Ugyanakkor a tanulmány eredményeit az embrionális hemaiopoiezis képviselői három osztályba gerincesek (kétéltűek, madarak, emlősök), és különösen az elemzés a származási HSC felelősek végleges hemaiopoiezis szülés utáni egyedfejlődés ellentétben a klasszikus ötleteket. Azt találtuk, hogy a képviselők a fenti osztályok embriogenezis alakult két független területek, melyeken a GSK. Extraembryonalis „klasszikus” régió képviseli szikzacskó vagy annak analógjai, míg a közelmúltban azonosított intraembrionalnaya HSC lokalizációs zóna tartalmaz para-aorta mesenchyma és az AGM-területet. Ma azt lehet mondani, hogy a kétéltűek és madarak végleges HSC származó intraembrionalnyh forrásokból, míg az emlősök és az ember GSK része peteburkában a végleges vérképzésben is lehetetlen teljesen megszüntetni.

Embrionális vérképzés sziktömlőjébe lényegében primer erythropoiesis, amelyet az jellemez, megőrzése a kernel minden szakaszában eritrociták érési folyamatának és típusa a magzati hemoglobin-szintézis. A legfrissebb adatok szerint az elsődleges erythropoesiás hullám az embrionális fejlődés nyolcadik napján megszűnik a sárgabarackban. Ezt követi egy olyan időszak a felhalmozódása végleges eritroid progenitor sejtek - a BFU-E, amelyek képződnek kizárólag sziktömlőjébe és először a 9. Napon a terhesség. A következő szakaszban az embriogenezis már kialakult végleges eritroid progenitor sejtek - CFU-E, valamint a hízósejtek és a CFU-GM (!). Ez alapján a létezését a szempontból, hogy a végleges progenitor sejtek felmerülő peteburkában vándorolnak át a véráramba, felhalmozódik a májban, és gyorsan kezdeményezi az első fázisban intraembrionalnogo vérképzésben. Szerint az ilyen képviseletek, peteburkában lehet tekinteni, egyrészt, mert az a hely, az elsődleges eritropoiézisre és a többi - mint első forrásból végleges vérképző őssejtek az embrionális fejlődésben.

Az eredmények azt mutatják, hogy a telepképző sejtek nagy proliferatív potenciálú lehet izolálni a szikzacskós már a 8. Napon a terhesség, azaz a hosszú lezárása előtt az érrendszer az embrió és a szikzacskó. Továbbá származó sziktömlőjébe nagy proliferatív potenciálú in vitro telepképző sejtek, a méret és a celluláris készítmény, amely nem különböznek a megfelelő paramétereket a tenyészet növekedésének csontvelő őssejtek. Ugyanakkor, a kolónia retranszplantáció szikzacskó sejtek nagy proliferatív potenciálú kialakítva lényegesen több telepképző sejtek és lánya multipotens progenitor sejtekre, mint a csontvelő hematopoetikus progenitor sejtek.

A végső következtetést a szerepét a hematopoetikus őssejtek sziktömlőjébe végleges vérképzés adhat eredményt, amelyekben a szerzők kapott egy vonal az endoteliális sejtek a peteburkok (G166), amely hatékonyan támogatja a sejtproliferációt a fenotípusos és funkcionális jellemzőit HSC (AA4.1 + WGA +, alacsony sűrűségű és gyenge tapadási tulajdonságokkal). A tartalom a legújabb tenyésztve Táprétegként sejtek az S166 8 napon emelkedett több mint 100-szor. A vegyes kinőtt telepek az alréteg a S166-sejtvonal, azonosítottunk makrofágok, granulociták, megakariociták, monociták, és a robbanás sejtek, és a prekurzor sejtek a B-és T-limfociták. Szikzacskó sejtek nő egy airétegeinek endothel sejtek rendelkeznek azzal a képességgel, hogy reprodukálja magát, és tartott a kísérlet a szerzők három részeket. Recovery rajtuk keresztül a vérképzés felnőtt egerekben súlyos kombinált immunhiány (SCID) képződése kíséri az összes leukocita típusok, valamint a T-és B-limfociták. A szerzők azonban a kutatási sejtek alkalmazásával a szikzacskója 10 napos embrió, ahonnan az extra- és intraembrionalnye érrendszer már zárva van, amely nem zárja ki a sejtek közötti a sziktömlő GSK intraembrionalnogo eredetű.

Ugyanakkor, elemzése a hatása a vérképződési sejtek korai fejlődési szakaszban, mielőtt egyesítenénk a kiválasztott érrendszer az embrió és a szikzacskós (8-8,5 napos gesztációs) jelenlétét mutatta ki a prekurzorok a T és B sejtek sziktömlőjébe, de nem a szervezetben az embrió . Az in vitro eljárás kétlépéses tenyésztési rendszer egy egyrétegű epiteliális és subepithelialis sejtek a thymus mononukleáris sejteket differenciálásnak sziktömlőjébe előtti T és érett T-limfociták. Ugyanezen tenyésztési körülmények, hanem egyrétegű stromasejtek a máj és a csontvelő mononukleáris sejtek a peteburkok arra differenciálódtak pre-B-sejtek és az érett IglVT-B-limfociták.

A E vizsgálatok eredményei arra utalnak, a fejlődés lehetőségét a sejtek az immunrendszer extraembrionális peteburok szövet, a formáció a primer T-és B-sejtvonalakban tényezőktől függ, hematopoietikus stromális mikrokörnyezetében az embrionális szervek.

Más szerzők azt is jelezte, hogy szikzacskó sejtek potencia tartalmaz egy limfoid differenciálódás, és képződött limfociták nem különböznek azoktól antigén jellemzőit a kifejlett állatokat. Azt találtuk, hogy a sejtek a szikzacskója 8-9 napos embrió is visszaállíthatja a thymus limfopoézis a atimotsitarnom a megjelenése érett CD3 + CD4 + - és CD8 + limfociták SDZ + rendelkező díszített repertoárját T-sejt-receptorok. Így a csecsemőmirigy lehet lakott sejtek által függelékstruktúrák eredetű, de ez lehetetlen kizárni annak lehetőségét, hogy a migráció a csecsemőmirigy progenitor sejtek T-limfocitákat intraembrionalnyh limfopoiesis forrásokból.

Azonban transzplantációja peteburkában vérképző sejtek a besugárzott felnőtt címzettek nem mindig befejezett újratelepítési hosszú pusztított zónák vérképzési szöveti lokalizáció, a in vitro sejtekben peteburkában alkotnak lép-kolóniák sokkal kisebb, mint a sejtek AGM-területen. Bizonyos esetekben keresztül peteburkában sejtek 9 napos embrió is lehetséges, hogy a hosszú távú (legfeljebb 6 hónap) újratelepítési a vérképző szövetek besugárzott címzettnek. A szerzők úgy vélik, hogy a sejtek a sziktömlő fenotípus CD34 + c-kit + képességük elszaporodni az elpusztított vérképző szervek, nem csak nem különböznek azoktól a AGM-régió, hanem hatékonyabban helyreállítása vérképzésben, mint a szikzacskós bennük közel 37-szer nagyobb .

Meg kell jegyezni, hogy a kísérletekben, a hematopoietikus sejtek, a sziktömlőjébe marker antigéneket GSK (c-kit + és / vagy a CD34 + és CD38 +), amelyeket be közvetlenül a máj vagy a hasi véna utódait kezelt nőstény egereken injekciókat buszulfán 18. Nap a terhesség. Ezekben az újszülött állatokat saját mielopoézis volt élesen depressziós megszűnése miatt a vérképző őssejtek által okozott buszulfán. A transzplantáció után, a HSC-k a sziktömlő hónapokig és a perifériás vérben a címzettek azonosított tartalmazó vörösvértestekkel donor markert - glitserofasfatdegidrogenazu. Azt találtuk, hogy a szikzacskója GSK csökkentett tartalmára limfoid sejtek, mieloid és eritroid vonalból a vér, a csecsemőmirigy, a lépben és a csontvelőben, ahol a kiméraképződés szintje magasabb volt abban az esetben, intrahepatikus, nem intravénás peteburok sejtek. A szerzők úgy vélik, hogy a HSC a szikzacskója embriók fejlődésük korai szakaszában (legfeljebb 10 napig), a sikeres rendezése a vérképző szervek felnőtt címzettek igénylő előzetes együttműködés a vérképzési mikrokörnyezet a máj. Lehetséges, hogy az embriogenezis van egy egyedülálló fejlődési szakaszban, amikor a sejtek a szikhólyag, vándorló elsősorban a májban, majd képessé megtelepedni a stroma vérképző szervek felnőtt címzettnek.

Ebben a tekintetben meg kell jegyezni, hogy a kimérizmusa sejtek az immunrendszer gyakran megfigyelhető a transzplantáció után csontvelői sejtek besugárzott címzettek szexuálisan érett - a vérsejtek a donor utolsó fenotípusok elég nagy mennyiségben találhatók közül a B- és T-limfociták és granulociták címzett tart, hogy legalább 6 hónap.

Morfológiai módszerek hematopoietikus sejtek emlősökben első észlelt a 7. Napon az embrionális fejlődés, és bemutatja hematopoietikus szigeteken edényeit a szikzacskós. Azonban a természetes hematopoietikus differenciálódást sziktömlőjébe korlátozódik primer eritrociták megőrzése mag és szintetizáló magzati hemoglobint. Azonban a hagyományosan úgy gondolták, hogy a szikzacskós az egyetlen forrása a HSC vándorló vérképző szervek, a fejlődő magzat, és a végleges hemaiopoiezis felnőtt állatok megjelenése óta HSC a szervezetben az embrió bezárását az érrendszer az embrió, és szikhólyag. Ennek alátámasztására a szempontból, adatok szerint, hogy in vitro klónozása sejtek a peteburkok vezetnek a granulociták és makrofágok, egy in vivo - lépkolóniák. Ezután a transzplantáció során kísérletekben azt találták, hogy a vérképző sejtek a szikhólyag, amely a szikzacskós képesek differenciálódni csak az elsődleges vörösvérsejtek a mikrokörnyezet a máj újszülött és felnőtt SCID egerek pusztított csecsemőmirigy vagy stroma feeder képessé elszaporodni a vérképzési szervek helyreállítása valamennyi még felnőtt fogadó állatoknál is. Elvileg ez annak tudható, hogy a kategóriába igazi GSK - mint a sejt működését és a születés utáni időszakban. Feltételezzük, hogy a szikzacskós, valamint a közgyűlés régió forrása HSC végleges vérképzésben emlősök azonban még nem tisztázott, hogy hozzájárulnak a fejlesztése a vérképző rendszer. Nem értem, a biológiai értelmét és abban az első embriogenezis emlősök, két vérképző szervek hasonló funkciókat.

Folytatódik a kérdések megválaszolása. In vivo nem sikerült bizonyítani jelenlétében szikzacskója embriók 8-8,5 napos sejt limfopoézis csökkentésében, majdnem halálosan besugárzott SCID-egerek súlyos hiánya a T és B-limfociták. A tojássárgája vérképzősejtjeit intraperitoneálisan és közvetlenül a lép és a máj szövetébe injektálták. 16 hét elteltével címzettek azonosított TCR / CD34 \ CD4 + és CD8 + T-limfociták és B-220 + IgM + B-sejtek jelzett antrhgenami donor MHC. A szervezetben az őssejtek 8-8,5 napos embriói, amelyek képesek az immunrendszer helyreállítására, a szerzők nem találtak.

Szikzacskó hematopoetikus sejtek rendelkeznek nagy proliferatív potenciálú, és képesek a hosszú távú önreprodukciója in vitro. Egyes szerzők azonosították ezeket a sejteket, mint az alapja a hosszú távú HSC (körülbelül 7 hónap) a generációs eritroid progenitor sejtek elkülönülő csontvelő progenitor eritroid vonal passzálása hosszabb időtartamú, nagy méretű telepeket, fokozott érzékenység a növekedési faktorok és a hosszabb ideig tartó proliferációját. Továbbá, kötött megfelelő tenyésztési szikzacskó sejteket in vitro körülmények között képződnek, és progenitor sejtek a limfoid sorozat.

Ezek az adatok arra utalnak, hogy általános forrása a szikzacskós GSK, ahol kevésbé elkötelezett és ezért nagy proliferációs potenciállal rendelkezik, mint a csontvelő őssejtek. Azonban, annak ellenére, hogy a szikzacskós tartalmaz pluripotens hematopoetikus progenitor sejtek, a hosszú távú támogató különböző vonalak a hemopoetikus differenciálódás in vitro, az egyetlen kritérium a hasznosságát GCW hogy képesek elszaporodni elhúzódó rendelkezik a vérképző szervek a recipiens, hematopoietikus sejtek, amelyek genetikailag hiányos vagy sérült. Így a fő kérdés az, hogy a pluripotens vérképző sejtek peteburkok vándorolnak, és gyarmatosították a vérképző szervek és tselesoorbrazno felül kell vizsgálni híres munkája, amely azt bizonyította, hogy képesek elszaporodni a vérképző szervek az ivarérett állatra a kialakulását a nagy vérképzési vonalak. Az embriókat a madarak a 70-es években azonosítottak intraembrionalnye források végleges HSC hogy már megkérdőjelezték a megállapított fogalmakat a származási függelékstruktúrák GSK, beleértve képviselői más osztályokba gerincesek. Az elmúlt években voltak kiadványok jelenlétében emlősök és emberek hasonló intraembrionalnyh oldalakat tartalmazó GSK.

Ismét megjegyezzük, hogy az alapvető ismereteket ezen a területen rendkívül fontos gyakorlati transzplantáció, hiszen nem csak segít meghatározni az előnyös HSC-forrás, hanem létrehozza a sajátosságait interakciós primer vérképző sejtek genetikailag idegen organizmusok. Ismeretes, hogy beadása humán hematopoetikus őssejtek magzati birkamáj organogenezis embrió szakaszban termeléséhez vezet kiméra állatok, a vér és a csontvelő stabilan határozzuk 3-5% humán vérképzési sejtek. Ebben az esetben az emberi HSC nem változtatnak kariotípus, miközben a gyors szaporodásához és képes különbséget. Ezen túlmenően, az átültetett xenogén HSC nem ütközik az immunrendszert és fagocita sejtek a gazdaszervezet és nem alakul át tumorsejtek, hogy alapját képezte az intenzív módszereinek fejlesztése intrauterin korrekciójára örökletes genetikai betegség segítségével gszt-k vagy a HSC-k transzfektált deficiens gének.

De az embriogenézis fázisában célszerűbb-e ilyen korrekciót végrehajtani? Sejteket először, meghatározva, hogy vérképzés emlősökben jelennek beültetés után azonnal (nap 6 gesztációs), amikor a morfológiai jellemzőit hematopoietikus differenciálódás és a vélelmezett hematopoietikus szervek jelenleg még nem áll rendelkezésre. Ebben a szakaszban, a diszpergált egér embrió sejtek újra benépesíthet a vérképző szervek besugárzott recipiensekbe alkotnak eritrociták és a limfociták, a különböző a gazdasejtekből vagy a hemoglobin, ennek típusát rendre glitserofosfatizomerazy és kiegészítő kromoszomális marker (Tb) a donor sejtek. Emlősökben, mint a madarak, valamint a sziktömlő a lezárás a teljes vaszkuiáris ágynak közvetlenül a szervezetbe az embrió a para-aorta splanhnoplevre jelennek hematopoietikus sejtek. Tól AGM-allokált területe hematopoietikus sejtek AA4.1 + fenotípust, azonosított multipotens hematopoietikus sejtek képező T- és B-limfociták, granulociták, megakariociták, és a makrofágok. Fenotípusosan, ezek a multipotens progenitor sejtek nagyon közel van a csontvelő HSC-k a felnőtt állatokban (CD34 + c-kit +). Száma multipotens AA4.1 + sejtek között AGM-sejtes terület kicsi - nem több, mint 1/12 része.

Az emberi embrióban megtalálható az állatok homológ AGM-régiója, egy HSC-t tartalmazó intraembryonikus régió is. Ezenkívül emberekben a multiproliferatív potenciállal rendelkező multipotens sejtek több mint 80% -a megtalálható az embrió testében, bár ezek a sejtek vannak jelen a tojássárgájában. A lokalizációjuk részletes elemzése azt mutatta, hogy több száz ilyen sejtet alakítanak ki kompakt csoportokká, amelyek a dorzális aorta ventrális falának endotéliumához közeli helyen helyezkednek el. Fenotipikusan CD34CD45 + Lin sejtek. Éppen ellenkezőleg, a tojássárgája, valamint az embrió egyéb májképző szervei (máj, csontvelő), ezek a sejtek egyedülállóak.

Következésképpen, humán embrionális AGM-régió tartalmaz klaszterek a vérképző sejtek, amelyek szorosan kapcsolódnak a ventrális dorzális aorta endotélium. Ez az érintkezés vezethető, és immunkémiai szinten - és klaszterek a vérképző sejtek és az endoteliális sejtek expresszáló vaszkuláris endoteliális növekedési faktor, az Flt-3 ligandum és receptoraik FLK-1 és STK-1, valamint a transzkripciós faktor leukémiás őssejtek. A AGM-terület mesenchymalis származékok sűrű tyazhem lekerekített sejtek mentén a dorzális aorta és kifejező tenascin-C - glikoprotein bázikus anyagot aktívan részt vesz a folyamatok a sejt-sejt kölcsönhatásokat és a migráció.

Multipotens őssejtek AGM-járásban a transzplantáció után gyorsan helyreállítani a vérképzés felnőtt egerekben, és kitett hosszú ideig (akár 8 hónapig) hatékony vérképzésben. Az ilyen tulajdonságokkal rendelkező sejtek tojássárgájában a szerzők nem fedezték fel. Az eredményeket a tanulmány megerősítette más munkát, ami azt mutatta, hogy a fejlődés korai szakaszában az embrió (10,5 nap) AGM régió az egyetlen forrása a sejtekben, amelyek megfelelnek a meghatározása GCW, a mieloid és limfoid helyreállítása hemaiopoiezis felnőtt besugárzott címzettnek.

Tól AGM-allokált területe stromális vonal AGM-S3, amelyek támogatják a generációs sejtek tenyészetben CFU-GM elkötelezett progenitor, BFU-E, CFU-E és CFU vegyes típusú. A tartalom a legújabb, amikor tenyésztett feeder alsó réteg AGM-S3 sejtvonal növeli 10-80 alkalommal. Ezért, a mikrokörnyezetében AGM-régió jelen kötőszöveti sejtek, hatékonyan támogatja a vérben, ezért azt AGM-területen is szolgálhatja embrionális vérképző szervek - a végleges HSC-forrás, amely a GSK képező hematopoetikus szövet egy felnőtt állat.

Részletes immunofenotipirovanie sejtösszetételének AGM-régió azt mutatta, hogy ez laknak nemcsak multipotens hematopoietikus sejtek, hanem a sejtek elkötelezett a mieloid és limfoid (T és B limfociták) differenciálódását. Azonban, ha a molekuláris elemzése az egyes CD34 + c-kit + sejtek AGM-régió alkalmazásával polimeráz-láncreakció kiderült aktiváló csak a béta-globin és mieloperoxidáz de nem limfoid kódoló gének szintézisét CD34, Thy-1 és a 15. A részleges aktiválási lineage-specifikus gének jellemző a HSC és a progenitor sejtek generációjának korai ontogenetikai szakaszaiban. Tekintettel arra, hogy a szám kommiti- Rowan őssejtek AGM-terület 10 napos embrió 2-3 nagyságrenddel kisebb, mint a máj, azt lehet mondani, hogy a 10. Napon az embrionális hemaiopoiezis AGM csak a kezdet, mivel elsősorban a a hematopoietikus vonalak már ebben az időszakban vannak telepítve.

Sőt, ellentétben a korábbi (9-11 nap) a vérképző őssejtek peteburkában és a terület a közgyűlés, amely a vérképző repopuláló mikrokörnyezet az újszülött, de nem felnőtt, a vérképző őssejtek 12-17 napos magzati máj nem igényel születés utáni korai mikrokörnyezet és a vérképző szervek elfoglalni egy felnőtt állat nem rosszabb, mint egy újszülött. HSC transzplantációja után magzati máj felnőtt hematopoiezis besugárzott recipiens egerekben volt poliklonális természetű. Ezen túlmenően, a jelzett telepeket látható, hogy a művelet a létrehozott klónok teljesen engedelmeskedik klonális egymásutánban, kimutatható a felnőtt csontvelőben. Ezért a GSK magzati máj jelölt annyi enyhe körülmények nélkül prestimulyatsii exogén citokinek már az alapvető attribútumait felnőtt HSC-k nem szükséges a korai poszt-embrionális mikrokörnyezet, az állam a mély pihenés transzplantáció után, és mozgósította klonoobrazovanie szekvenciálisan mintának megfelelően klonális egymásutánban.

Nyilvánvaló, hogy a klonális öröklés jelenségével valamivel jobban meg kell oldanunk. Erythropoiesis hajtjuk hematopoetikus őssejtek nagy proliferációs potenciál és a képesség, hogy differenciálódjanak összes sejtvonalban elkötelezett progenitor vérsejtek. Során normális vérképzés intenzitása többsége hematopoietikus őssejtek alvó állapotban, és mobilizálják a proliferációját és differenciálódását egymás alkotó egymást követő klónok. Ezt a folyamatot klonális öröklésnek hívják. A hematopoietikus rendszerben a klonális szekvencia kimutatására vonatkozó kísérletes bizonyítékokat retrovirális géntranszferrel jelzett GSK-vizsgálatokban szereztek. Felnőtt állatokban a vérképzést a GSK-ból származó számos, egyidejűleg működő hemopoetikus klón tartja fenn. A klonális szekvencia jelenségére alapozva kifejlesztették az újratelepítési megközelítést a GCS azonosításához. Ezen elv szerint, különbséget kell tenni a hosszú távú HSC (hosszú távú vérképző őssejt, LT-HSC), képesek helyreállítani a vérképző rendszer az egész életen át tartó tanulás, valamint a rövid távú HSC, ezt a feladatot egy korlátozott ideig.

Ha figyelembe vesszük a vérképzési őssejtek szempontjából repopulyatsionnogo megközelítés jellemző vérképző magzati májsejtek, hogy képesek létrehozni egy kolónia, amely mérete sokkal nagyobb, mint azok növekedését GSK köldökzsinórvér vagy csontvelő, és ez vonatkozik minden típusú telepeket. Ez a tény már jelzi az embrionális máj hemopoetikus sejtjeinek nagyobb proliferatív potenciálját. Egy egyedülálló tulajdonsága a vérképző őssejtek magzati máj - rövidebb, összehasonlítva más forrásokból a sejtciklus, ami fontos a hatásfok szempontjából újratelepítési vérképzés transzplantáció. Elemzés a celluláris összetételét hematopoietikus kapott szuszpenziót forrásokból érett szervezetből, azt mutatja, hogy minden szakaszában ontogenezisének magvas sejtek bemutatására előnyösen véglegesen differenciálódott sejteket, a száma és a fenotípusa, amely függ a kortól, a donor vérképző ontogenetikai szövetet. Különösen, a szuszpenziót a mononukleáris csontvelőből és köldökzsinór vérsejtek több mint 50% áll az érett limfoid eredetű sejtek, mivel kevesebb mint 10% a limfociták megtalálható a magzati májban hemopoetikus szöveteket. Továbbá, a mieloid vonal sejtek magzati májban és magzati eritroid előnyösen mellett bemutatja, míg a köldökzsinór vér és a csontvelő granulocita-makrofág érvényesülnek elemek.

Fontos az a tény, hogy az embrionális máj a hemopoízis legkorábbi elődeinek teljes körét tartalmazza. Ez utóbbiak közé tartoznak az eritroid, granulopoietikus, megakariopoietikus és multinerális kolóniaképző sejtek. Az primitívebb progenitor - LTC-IC - képesek szaporodni és differenciálódni in vitro 5 vagy több hétig, és azt is, hogy fenntartsák a funkcionális aktivitás után megtapadását a szervezetben a címzett allogén, sőt xenogén transzplantációra immunhiányos állatokban.

Biológiai megvalósíthatósági túlsúlya a magzati eritroid májsejtek (legfeljebb 90% a teljes hematopoietikus sejtek) miatt van szükség, hogy a vörösvérsejt-massza gyorsan növekvő vértérfogat a fejlődő magzatban. A magzati máj erythropoiesis nukleáris eritroid prekurzor képviselt különböző érettségi fokú tartalmazó magzati hemogiobin (a2u7), amely annak köszönhető, hogy nagyobb az affinitása az oxigén biztosítja a hatékony felszívódását az utóbbi anyai vérből. Intenzívebbé erythropoiesis magzati májban van társítva lokális növekedése szintézisében eritropoietin (EPO). Érdemes megjegyezni, hogy a végrehajtás a hematopoietikus potenciál a hematopoetikus magzati májsejtek kellően jelenléte önmagában eritropoietin, mivel lineage elkötelezettség erythropoiesis csontvelő HSC és köldökzsinórvér kombinációjára van szükség a citokinek és a növekedési faktorok álló EPO, SCF, a GM-CSF és IL-3. Ebben a korai vérképzési sejteket izoláltunk magzati máj anélkül receptorait EPO, nem reagálnak a exogén eritropoietin. Indukálására erythropoiesis szuszpenzióban magzati máj mononukleáris sejtek jelenlétét igényli fejlettebb eritropoetinchuvstvitelnyh sejtek fenotípusának CD34 + CD38 +, hogy az EPO-receptort.

A szakirodalom még nem alakult konszenzus létrehozására vérképzés embrionális időszakban. Nem fennállását és funkcionális jelentőségének extra- és intraembrionalnyh forrásai a vérképző őssejtek. Ugyanakkor kétségtelen, hogy az embriogenezis emberi máj központi szerve a vérképzés és 6-12 hetes terhesség az elsődleges forrása a vérképző őssejtek, hogy feltölti a lép, a csecsemőmirigy és a csontvelő, GDR eléréséhez kapcsolódó funkciók a szülés előtti és utáni időszakokban fejlődés.

Újra meg kell jegyezni, hogy az embrionális májat más forrásokhoz képest a legmagasabb HSC-tartalom jellemzi. Az embrionális máj CD344 sejtjeinek kb. 30% -a rendelkezik a CD38 fenotípusával. Ugyanakkor, a számát limfoid progenitor sejtek (CD45 +) a korai szakaszában vérképzés a májban nem több, mint 4%. Azt találtuk, hogy, ahogy a magzat 7-17 gesztációs hét, a szám a B-limfociták fokozatosan nő a havi „lépés” 1,1%, míg a szint a GSK tartósan csökken.

A hematopoietikus őssejtek funkcionális aktivitása a forrás embrionális fejlődésének időszakától is függ. Vizsgálata májsejt telepképző aktivitása emberi embriók 6-8 perc, és 9-12 perc alatt hét gesztációs tenyésztve félszilárd táptalajon jelenlétében SCF, a GM-CSF, IL-3, IL-6 és az EPO azt mutatta, hogy az összes telepek 1 , 5-ször nagyobb, amikor a HSV embrionális májat a fejlődés korai szakaszában vetették. Ugyanakkor, a szám a máj progenitor sejtek mielopoézis CFU-GEMM 6-8 hetes embriogenezis több mint háromszorosa a 9-12 hetében. Általában, a máj hemopoetikus telepképző aktivitása terhesség első trimeszterében embrió sejtek szignifikánsan nagyobb volt, mint a magzati májsejtek a második trimeszterében.

A fenti adatok arra utalnak, hogy a magzati májban az embriogenezis jellemzi nem csupán nagy mennyiségben tartalmaz a korai hematopoietikus progenitor sejteket, de a hematopoietikus sejtekre jellemző a széles körű differenciálódását különböző sejtvonalakon. Ezek a jellemzők funkcionális aktivitásának szár vérképzési magzati májsejtek lehet némi klinikai jelentősége, mivel a minőségi jellemzők lehetővé teszik várható terápiás hatása, ha kifejezett transzplantáció még a kis mennyiségű nyert sejtek korai szakaszában a terhesség.

Mindazonáltal a hatékony transzplantációhoz szükséges hematopoietikus őssejtek számának problémája továbbra is nyitott és releváns. Kísérleteket tesznek annak megoldására, hogy az embrionális máj hematopoietikus sejtjeinek önálló reprodukcióját in vitro stimulálják citokinekkel és növekedési faktorokkal. Az embrionális máj korai GSC bioreaktorában állandó perfúzióval, 2-3 nap elteltével a kimeneten meg lehet szerezni az alapvonalakhoz képest 15-ször magasabb kórokozó hemopoetikus sejtek számát. Összehasonlításképpen meg kell jegyeznünk, hogy a HSC-kord vérének ugyanolyan körülmények között való 20-szoros növekedésének elérése érdekében legalább két hétig tart.

Ezért, a magzati májban különbözik a más forrásokból származó hematopoetikus őssejtek, mint magasabb tartalomnál elkötelezett és a korai hematopoietikus őssejtek. A kultúra magzati máj sejteknek növekedési faktorok a fenotípus CD34 + CD45Ra1 CD71l0W formájában 30-szor több kolónia, mint a hasonló köldökzsinórvér sejteket, és 90-szer nagyobb, mint a csontvelő HSC-k. A legkifejezettebb ezek a források a különbség a tartalma a korai hematopoietikus őssejtek képező vegyes telepeket - a CFU-GEMM a magzati májban meghaladja a köldökzsinórvér és a csontvelő, illetve 60 és 250-szer.

Fontos, hogy az a tény, hogy akár a 18. Héten az embrionális fejlődés (során elején vérképzés a csontvelőben) a vérképzési funkció megvalósítása során több mint 60% -át a májsejtekben. Mivel korábban a 13. Héten a magzati fejlődés emberekben hiányzik a csecsemőmirigy és timociták illetve transzplantáció a vérképző magzati májsejtek 6-12 hetében jelentősen csökkenti a reakció „graft versus host”, és nem igényli a kiválasztási egy hisztokompatibilisek donor, mivel lehetővé teszi a viszonylag könnyű megvalósítani hemopoietikus kimérizmus.