Hepatitis A vírus

A vírusos hepatitis A egy fertőző emberi betegség, amelyet elsősorban májkárosodás jellemez, és klinikailag mérgezésben és sárgaságban nyilvánul meg. A hepatitis A vírust S. Feinstone (és munkatársai) fedezte fel 1973-ban immunelektronmikroszkópia módszerével, majmok - csimpánzok és selyemmajmok - fertőzésével. Az immunelektronmikroszkópia módszerének lényege, hogy specifikus antitesteket (lábadozó szérumot) adnak a hepatitis A-ban szenvedő beteg székletének szűrletéhez, és az üledéket elektronmikroszkópos vizsgálatnak vetik alá. A vírusok és a specifikus antitestek kölcsönhatása miatt specifikus aggregáción mennek keresztül. Ebben az esetben könnyebben kimutathatók, és az antitestek hatására bekövetkező aggregáció megerősíti a kórokozó specificitását. S. Feinstone felfedezését önkénteseken végzett kísérletek is megerősítették.

A hepatitis A vírus gömb alakú, a virion átmérője 27 nm. A genomot egyszálú pozitív RNS képviseli, amelynek MD értéke 2,6 mm. Nincs szuperkapszid. A szimmetria típusa köbös - ikozaéder. A kapszid 32 kapszomerből áll, négy polipeptidből (VP1-VP4) épül fel. Tulajdonságait tekintve a hepatitis A vírus a Heparnovirus nemzetségbe, a Picornaviridae családba tartozik. Antigénjeit tekintve a hepatitis A vírus (HAV - hepatitis A virus) homogén. A HAV jól szaporodik csimpánzok, páviánok, hamadryas páviánok és selyemmajmok szervezetében. Hosszú ideig a vírust nem lehetett tenyészteni. Csak az 1980-as években vált lehetővé olyan sejtkultúrák előállítása, amelyekben a HAV szaporodik. Kezdetben rhesus makákó embrióvese folyamatos sejtvonalait (FRhK-4 kultúra) használták erre a célra, ma pedig zöld majomvese sejtek folyamatos sejtvonalát (4647 kultúra) alkalmazzák.

A WHO szakértőinek ajánlásai szerint a hepatitis A vírus markereinek következő nómenklatúráját fogadták el: hepatitis A vírus - HAV antitestek a hepatitis A vírussal szemben: anti-HAV IgM és anti-HAV IgG.

A HAV egy 27-30 nm átmérőjű, ikozaéderes szimmetriájú és homogenitású kis részecske. Az immunaggregációs módszerrel kapott elektrongram elektronsűrű részecskéket mutat, felületükön szimmetrikusan elrendezett kapszomerekkel. Negatív kontraszt esetén mind a teli, mind az üres részecskék láthatók a készítményekben. A HAV nukleokapszidja, ellentétben az influenzáéval, nem rendelkezik felületi kiemelkedésekkel és membránnal. Fontos az is, hogy a HAV virionnak nincs szív alakú szerkezete.

Fizikai-kémiai tulajdonságai alapján a hepatitis A vírust a pikornavírus családba, az enterovírus nemzetségbe sorolják, sorszáma 72. Ez a taxonómia azonban túl szokatlannak bizonyult, és a WHO lehetségesnek tartotta a „hepatitis A vírus” terminológia megtartását.

A Picornaviridae családba tartozó összes vírushoz hasonlóan a hepatitis A vírus is ribonukleinsavat tartalmaz. Egyes laboratóriumok bebizonyították a hepatitis A vírus genomjának klónozásának lehetőségét, ami megnyitja a lehetőséget a vakcinák előállítására.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Hepatitis A vírusrezisztencia

A vírus viszonylag ellenálló a magas hőmérséklettel, savakkal, zsíroldószerekkel (lipidek nélkül), fertőtlenítőszerekkel szemben, és jól tolerálja az alacsony hőmérsékletet. Mindez hozzájárul a hosszú távú fennmaradásához a külső környezetben. Szobahőmérsékleten több hétig is túlél, 60 °C-on 4-12 óra után részlegesen elveszíti fertőzőképességét, 85 °C-on pedig néhány perc után teljesen. Rendkívül ellenáll a klórnak, aminek köszönhetően képes behatolni a csapvízbe a víztisztító létesítmények gátain keresztül.

Összefoglalva az összes adatot, a hepatitis A vírust a következőképpen jellemezhetjük:

• a természetes gazda az ember;
• kísérleti állatok - selyemmajmok, csimpánzok;
• a fertőzés forrása a széklet;
• a betegség járványos és endémiás;
• átviteli út: feco-orális;
• inkubációs időszak - 14-40 nap;
• átmenet krónikus hepatitiszbe - nem figyelhető meg.

A HAV immunológiai tulajdonságai a következők:

• Prototípus törzsek - Ms-1, CR-326, GВG. Mindegyik immunológiailag hasonló vagy azonos;
• Az antitestek - IgM és IgG - a vírus strukturális fehérjéinek bevezetésére válaszul termelődnek, és védő hatásúak;
• I. Az emberi szérum gamma-globulin védő hatása – megelőzi vagy enyhíti a betegséget, ha a fertőzés előtt vagy a lappangási időszak alatt adják be.

Az NAU fizikai-kémiai jellemzői a következők:

• Morfológia: héj nélküli gömb alakú részecske köbös szimmetriával, a kapszid 32 kapszomerből áll;
• Átmérő - 27-30 nm;
• Sűrűség CsCl-ban (g/cm3) - 1,38-1,46 (nyitott részecskék), 1,33-1,34 (érett virion), 1,29-1,31 (éretlen virionok, üres részecskék);
• Ülepedési együttható - 156-160 érett virion;
• A nukleinsav egyszálú, lineáris RNS;
• Relatív molekulatömeg - 2,25 × 106-2,8 × 106 KD;
• A nukleotidok száma 6500-8100.

A HAV stabilitása fizikai és kémiai hatások alatt a következő:

• Kloroform, éter - stabil;
• Klór, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 perc - részleges inaktiválás;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 perc - teljes inaktiválás;
• Formalin, 1:4000, 35-37 °C, 72 óra - teljes inaktiválás, 1:350, 20 °C, 60 perc - részleges inaktiválás.

Hőmérséklet:

• 20-70 °C - stabil;
• 56 °C, 30 perc - stabil;
• 60 °C, 12 óra - részleges inaktiválás;
• 85 °C, 1 perc - teljes inaktiválás;
• Autoklávozás, 120 °C. 20 perc - teljes inaktiválás;
• Száraz hő, 180 °C, 1 óra - teljes inaktiválás;
• UFO, 1,1 W, 1 perc - teljes inaktiválás.

A bemutatott adatok azt mutatják, hogy fizikai-kémiai tulajdonságait tekintve a hepatitis A vírus áll legközelebb az enterovírusokhoz. Más enterovírusokhoz hasonlóan a HAV is számos fertőtlenítőoldattal szemben ellenálló, és 85 °C-on és autoklávban néhány percen belül teljesen inaktiválódik.

Bizonyított tény, hogy a hepatitis A vírus képes szaporodni emberi és majom sejtkultúrák primer és folyamatos monorétegű sejtvonalaiban. A hepatitis A vírus különösen aktív szaporodása in vitro tenyészetekben figyelhető meg, amikor beteg majmok májkivonatát használják kiindulási anyagként. Meg kell azonban jegyezni, hogy a hepatitis A vírus in vitro tenyészetekben történő szaporodásával kapcsolatos összes kísérletben felhívják a figyelmet a primer passzázsok során eltelt hosszú inkubációs időre (akár 4-10 hétig is eltarthat), ezt követően a vírus genetikai anyagának felhalmozódása növekszik, de az abszolút értékek továbbra is nagyon jelentéktelenek maradnak, ami sok kutatónak alapot ad arra, hogy a hepatitis A vírus szövetkultúrákban való hiányos replikációjáról beszéljen.

Összefoglalva a hepatitis A vírus szöveten kívüli tenyészetekben történő szaporodásával kapcsolatos irodalmi adatokat, elmondható, hogy a HAV hosszú távú in vitro túlélésének ténye kétségtelen. A vírus stabil, magas szintű replikációjának optimális feltételeit még nem sikerült véglegesen azonosítani, ami akadályozza biológiai tulajdonságainak tanulmányozását, a diagnosztikai készítmények előállításához és a vakcinatervezéshez szükséges reagensek forrásának megszerzését.

Ugyanakkor a szakirodalomban optimistább ítéletek is találhatók ezzel a problémával kapcsolatban. A hepatitis A vírus tenyésztésével kapcsolatos összes kérdés megoldása a közeljövő kérdése. A HAV reprodukciójának optimális feltételeinek vizsgálatakor a rhesus makákó embrionális vesesejtjeinek kultúrájában két fázist azonosítottak: a fertőző vírus termelésének fázisát (az 5. áthaladás szintjén akár 6-8 napig) és a vírusantigén intenzív felhalmozódásának fázisát. Azt is kimutatták, hogy a vírusantigén legjelentősebb felhalmozódása az úgynevezett görgős tenyésztés (forgólombikok) körülményei között történik. Ez a módszer széleskörű lehetőségeket nyit meg a kulturális antigén nagy mennyiségű előállítására, és ennek következtében megjelenik a diagnosztikai rendszerek előállításához és a vakcinák gyártásához szükséges alapanyag.

A hepatitis A epidemiológiája

A hepatitis A vírus magas patogenitású az emberre nézve. A WHO (1987) szerint már egyetlen virionnal való fertőzés is elegendő a betegség kiváltásához. A gyakorlati fertőző dózis azonban valószínűleg sokkal magasabb. A fertőzés egyetlen forrása a fertőzött személy. A vírus nagy mennyiségben ürül a széklettel 12-14 nappal a sárgaság kezdete előtt és az ikterikus periódus 3 hete alatt. Nem találtak szignifikáns különbséget a kórokozó kiválasztásában az ikterikus, anikterikus és tünetmentes hepatitis A formában szenvedő betegek között. A fertőzés útja széklet-orális, főként vízzel, valamint háztartási és élelmiszer útján terjedő. A fertőzés útja széklet-orális, főként vízzel, valamint háztartási és élelmiszer útján terjedő. A vírus átvitelének fő (elsődleges) útja a vízzel terjedő. A levegőben lévő cseppek útján történő fertőzés is lehetséges. A lakosság érzékenysége univerzális. Többnyire a 14 év alatti gyermekek érintettek. A betegségnek kifejezett őszi-téli szezonalitása van.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Hepatitis A tünetei

A lappangási idő 15 és 50 nap között változik, a vírus fertőző dózisától függően, de átlagosan 28-30 nap. A szervezetbe jutva a hepatitis A vírus a regionális nyirokcsomókban szaporodik, behatol a vérbe, majd a májsejtekbe, és akut diffúz hepatitiszt okoz, amelyet a máj hepatocitáinak és retikuloendoteliális elemeinek károsodása, valamint méregtelenítő és barrier funkcióinak csökkenése kísér. A hepatociták károsodása nem a vírus közvetlen hatásának, hanem immunpatológiai mechanizmusok eredményeként következik be. A hepatitis A legjellemzőbb képe az akut ikterikus ciklikus forma: inkubációs időszak, prodromális (preikterikus), ikterikus időszak és lábadozás. A fertőzés gócpontjaiban azonban nagyszámú ikterikus és tünetmentes fertőzési formájú beteget észlelnek, amelyek száma jelentősen meghaladja az ikterikusakat ("jéghegy-jelenség").

A fertőzés utáni immunitás erős és tartós, melyet a vírust neutralizáló antitestek és az immunmemória sejtek okoznak.

A hepatitis A mikrobiológiai diagnosztikája

A hepatitis A diagnosztikája (kivéve az állatok - csimpánzok, selyemmajmok, páviánok - fertőzését, amelyekkel nem rendelkezünk) különféle immunológiai módszereken alapul: RSC, immunfluoreszcens módszer, immunadhéziós hemagglutináció (a vírusantigén + antitest komplex komplement jelenlétében adszorbeálódik az eritrocitákon, és azok összetapadását okozza). Ezen módszerek alkalmazási lehetőségei azonban korlátozottak a specifikus vírusantigének hiánya miatt, és az immunfluoreszcens reakció májbiopsziát igényel, ami nemkívánatos. Az immunelektronmikroszkópia módszere megbízható és specifikus, de nagyon munkaigényes. Ezért eddig az egyetlen elfogadható immunológiai reakció az IFM vagy RIM formájában lévő szilárd fázis immunszorbens analízisének módszere, különösen az M osztályú immunglobulinok "befogásának" módosítása esetén. Hazánkban erre a célra egy tesztrendszert javasoltak - a "DIAGN-A-HEP". Ennek a tesztrendszernek a működési elve a következő. Először az M osztályú immunglobulinok (antiimmunoglobulinok M) elleni antitesteket polisztirol kutak falára adszorbeálják, majd hozzáadják a vizsgálandó beteg szérumát. Ha IgM antitesteket tartalmaz, azok az M osztályú antitestekhez kötődnek, majd egy specifikus vírusantigént (hepatitis A vírus) adnak hozzá, amelyet sejtkultúrában tenyésztéssel nyernek. A rendszert mossák, és torma-peroxidázzal jelölt vírusellenes antitesteket adnak hozzá. Ha a rendszer mind a négy komponense kölcsönhatásba lép, egy négyrétegű "szendvics" alakul ki:

• antiimmunoglobulinok M,
• M immunglobulinok (a hepatitis A vírus ellen - a vizsgált beteg szérumában),
• vírus antigén,
• enzimmel jelölt vírusellenes antitestek.

A komplex kimutatásához az enzim szubsztrátját adják a kutakhoz. Az enzim hatására az elbomlik, és színes termék keletkezik. A szín intenzitása kvantitatívan mérhető spektrofotométerrel vagy fotokoloriméterrel.

Az IgM „befogási” módszer előnye, hogy az ezen immunglobulin osztályba tartozó antitestek az elsődleges immunválasz során jelennek meg, és a fertőzés aktív stádiumát jelzik, majd a betegség lefolyása után eltűnnek. Ezzel szemben az IgG osztályba tartozó vírusellenes antitestek a betegség lefolyása után hosszú ideig fennmaradnak, szerzett immunitást biztosítva. A hepatitis A vírus kimutatására egy DNS-próba módszert javasoltak: próbaként komplementer vRNS DNS-t használnak.

Hepatitis A kezelése

Mivel a vírusos hepatitiszben az interferon termelése megszakad, a hepatitis A kezelése az interferon és endogén szintézisének induktorának, az amixinnek az alkalmazásán alapul.

A hepatitis A specifikus megelőzése

A hepatitis A korábban széles körben alkalmazott szeroprofilaxisa gamma-globulinnal nem igazolta magát, ezért a fő hangsúlyt a vakcinációs profilaxis elvégzésére helyezték, a hepatitis A elleni oltást végzik. Erre a célra különféle típusú vakcinákat fejlesztenek ki és már használnak. Oroszországban 1995-ben szereztek be egy hatékony hepatitis A elleni vakcinát, amelyet ma már sikeresen alkalmaznak.