A köldökzsinórvér hemopoetikus őssejtjei

A szív alakú vér a hematopoietikus őssejtek forrásaként hat a hematopoietikus sejtek proliferatív potenciáljára és repopulációs képességére. Ismételten bizonyították, hogy a köldökzsinór vér a szállítás idején elég nagy számú rosszul elkötelezett hematopoietikus progenitorsejtet tartalmaz. Egyes szerzők úgy vélik, hogy a vérkeringés vérképzőszervi őssejtjeinek átültetésének előnye az, hogy nincs szükség HLA antigénekkel kompatibilis donorok keresésére. Szerintük, a éretlensége az újszülött immunrendszere okai csökkent funkcionális aktivitását immunkompetens sejtek, és ennek megfelelően, alacsonyabb, mint a csontvelő-átültetés, A súlyos reakció „graft-versus-host”. Ebben a cellában transzplantátum túlélését köldökvér nem alacsonyabb, mint a csontvelő sejtek, még abban az esetben egy kisebb számú GSK beadott per 1 testtömeg-kg. Ugyanakkor véleményünk szerint az optimális kérdések száma transzplantált köldökzsinórvért szükséges a hatékony megtapadását a szervezetben a címzett, az immunológiai kompatibilitás, és számos más szempontból a transzplantáció a vérképző őssejtek köldökzsinórvérből igényel komolyabb elemzést.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

A köldökzsinórvér vérátömlesztéses őssejtjeinek kinyerése

A megszerzésére irányuló eljárás hematopoietikus őssejtek köldökvér megköveteli a bevitel közvetlenül a születés után, és annak elválasztását a méhlepényből, amikor a placenta in utero vagy ex méhen belüli, valamint a császármetszés, hanem ex utero. Az eredmények azt mutatják, hogy abban az esetben, lerövidíti az a születéstől a újszülött placenta szétválasztás akár 30 másodpercig térfogatának köldökzsinórvér kapott növekszik átlagosan 25-40 ml. Egy későbbi eljárással ugyanannyi vér vész el. Azt találtuk, hogy a korai elválasztás a gyermek a méhlepényből nem jár semmilyen negatív következménye az újszülött.

Az orosz Kutató Intézet Hematológiai és Vértranszfúziós kifejlesztett hatékony és alacsony költségű technológia mind a köldökzsinórvér fiziológiás sejtvonalak ((70,2 + 25,8) ml) és császármetszés ((73,4 + 25,1) ml). Eljárás elválasztására köldökzsinór vér elegendően nagy hozammal a mononukleáris sejtek és a magvas - (83,1 + 9,6), és (83,4 + 14,1)%, ill. Javított eljárás mélyhűtés köldökzsinórvér, amely biztosítja a magas biztonsági mononukleáris sejtek és CFU-GM - (96,8 + 5,7), és (89,6 + 22,6)%, ill. A hatékonyság a vízelvezető köldökzsinórvér mintavételi módszer segítségével a tartály „Kompoplast-300” (Oroszország). Kerítés köldökzsinórvér szerzők végre közvetlenül a szülés után, és annak elválasztását a placenta, tekintve helyezi a méhlepény méhen belüli vagy ex méhben. Mielőtt felszúrásával köldökvéna köldökzsinór egyszer kezeljük 5% tinktúra jód, majd kétszer - 70% etil-alkoholt. A vér a csatlakozó csöveken keresztül a spontán tárolóedénybe áramlik. A kerítés időtartama nem haladta meg a 10 percet. 66 gyűjtött vízelvezető térfogat módszer köldökzsinór vérmintákat átlagolt (72 + 28) ml, és a leukociták számát a minta átlagolt teljes - (1,1 + 0,6) x x 107. Az elemzés köldökvér sterilitási (bakteriális szennyeződést, HIV-1 vírusok a hepatitis B és C, a szifilisz, és a citomegalovírus fertőzés) csak az egyik mintában azonosítottuk IgG-antitestek hepatitis C egy másik vizsgálatban, ha a méhlepény a születés után a magzati felületén helyeztük el egy speciális keret lefelé, a zsinór kezeltük 5% -os nátrium- jód és 75% etil th-alkohol. Köldökvéna tűvel elvezetve transzfúziós rendszer (G16). A vér spontán leeresztette a tartályba. Az így kapott vérmennyiség átlagban (55 + 25) ml volt. A papír G. Kogler és munkatársai (1996) a köldökzsinórvér vett zárt módon, és kapott nagy mennyiségű vér - átlagosan (79 + 26) ml. A szerzők megjegyzik, hogy ezek között 574 köldökzsinórvér minta tartalmaz körülbelül 7% -kal kevesebb, mint 40 ml vért, amely nem teszi lehetővé, hogy használja őket transzplantációra. K. Isoyama és munkatársai (1996), figyelembe véve a köldökzsinórvérből aktív exfusion segítségével fecskendők, kapott átlagosan 69,1 ml vért (köldökzsinórvér térfogata változtatható 15-135 ml). Végül, A. Abdel-Mageed PI együttműködők (1997) által punovinnoy véna katéterezés kapunk átlagosan 94 ml köldökzsinórvér (56-143 ml).

Kockázatának csökkentése érdekében a iatrogén fertőzés és szennyeződés anyai váladék kifejlesztett zárt rendszer vérvételi alapján a széles körben használt transfuzioinoy rendszer Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), amely 62,5 ml CPDA (citrát-foszfát-dextróz adeninnel), mint antikoaguláns. A technológia előállítására anyag rendkívül fontos a készítmény egy minőségi mintát viszonyítva a tartalom mennyisége és tisztasága a sejtszuszpenzióhoz. A létező módszerek a köldökzsinórvér gyűjtése, kotoryeuslovno sorolni zárt, részben nyitott és a nyitott rendszer sleduetotdavat preferencia első, például egy zárt rendszerben jelentősen csökkenti a mikrobiális szennyeződés az anyag, valamint a szennyeződés a sejtszuszpenziót az anya sejt.

A. Nagler és szerzők (1998) összehasonlító elemzést végeztek mindhárom vezetékvér-mintavevő rendszer hatékonyságáról. Az első változatban az eljárást zárt rendszerben végeztük a vér exfúziójával közvetlenül a tartályba. Egy második kiviteli alak a köldökzsinórvér kaptuk aktív exfusion vér shpritsamr1 további mosási placenta vénák és egyidejű vízelvezető vér a tartályba (kültéri mód). A harmadik változatban a vért félig nyitott rendszerben visszavontuk, és fecskendõkkel aktív módon extraháltuk, majd a köldökzsinór arteriaján keresztül mártottuk a tartályba való egyidejû exfúzióval. Az első változatban a szerzők köldökzsinórvért kaptak (76,4 + 32,1) ml leukocitaszámmal (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ / ml vérre. A második kiviteli alakban, a megfelelő számokat (174,4 + 42,8) ml és (8,8 + 3,4) × 10 ⁶ / ml; a harmadik - (173,7 + 41,3) ml és (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. A köldökzsinór vérminták leggyakoribb fertőzését nyílt rendszer alkalmazásakor észlelték. A méhlepény tömegének és a kivont vér térfogatának közvetlen összefüggése jön létre - növekvő méhlepény tömegével nő a gyűjtött vér mennyisége.

Miután gyűjteménye köldökzsinórvér lépés követi szétválasztás - mononukleáris sejt elkülönítése és tisztítása a sejt szuszpenziót eritrociták. Kísérleti körülményei magvas sejtek izoláljuk a kiülepedési metilcellulóz eritrocita-iízis ammónium-kloriddal. Ugyanakkor klinikai célokra a metil-cellulózt nem szabad felhasználni, mivel a hematopoietikus őssejtek vesztesége eléri a 50-90% -ot. Lysing vörösvérsejtek kapcsolatban nagy mennyiségű A munkaoldatot a klinikán is alig végzett, bár a százalékos elkülönítést ebben a módon magvas sejtek a fenotípusa CD34 +, és a progenitor sejtek CFU-GM funkciók és a CFU-GEMM lényegesen magasabb. A sűrűséggradiens vételi sűrűségű oldat (BDS72) mononukleáris sejtek izolálására új szerről számoltak be. Ez az anyag a következő fiziológiai paraméterekkel rendelkezik: pH = 7,4, ozmolalitás - 280 mosm / kg, sűrűség - 1,0720 g / ml. A szerzők szerint a CD34-pozitív sejtek 100% -ának izolálása és a vörösvérsejtek 98% -ának eltávolítása segítséget nyújt. Azonban a klinika még nem alkalmazza a BDS72-et.

Bizonyított eljárásokban a nucleated sejtek izolálását a köldökzsinórvérből általában 10% -os hidroxietil-keményítő vagy 3% -os zselatinoldat oldatát használják. Az eritrociták kicsapódásának hatékonysága és a nucleated sejtek izolálása mindkét esetben megközelítőleg egyenlő. Mindazonáltal, abban az esetben alkalmazásra ülepedő szer zselatin lehetséges valamivel nagyobb számú CFU-GM, mint amikor a HES. Feltételezzük, hogy a különbség a hasznosítás hatékonysága CFU-GM egyenlőtlen sebességű miatt lerakódása az egyes frakciók, vagy a magvas sejtek képességét HES molekulák abszorbeálódott hematopoietikus sejtfelszíni receptorokhoz, és ezáltal blokkolják azok érzékenységét kolónia stimuláló faktorok, amelyeket akkor alkalmaznak, ha tenyésztünk CFU-GM in vitro. Mindazonáltal mindkét üledékképző alkalmas lehet nukleált sejtek izolálására nagyméretű köldökzsinórvér-bankok létrehozásakor.

Elválasztási eljárások és mélyhűtés köldökzsinórvér, elvileg, nem különbözik azoktól, amelyek érvényesek a hematopoietikus őssejtek perifériás vér és a csontvelő, a felnőtt donorokból. De amikor nagyszámú köldökzsinór vérmintát készít a bankjai számára, az elkülönítés módszereinek elsősorban olcsóaknak kell lenniük. Ezért a jelen idő, sajnos, a szükségletek klinikai használatra bizonyult rutin módszerekkel az elszigeteltség és mélyhűtésénél köldökzsinórvér-sejtek, és hatékonyabb, de a módszerek is a sok finansovoemkie kísérletezők.

Átfogó értékelés kritériumai tekintetében maguk vérképző sejtek számát követelmények és a tanulmány a köldökzsinórvér minták felderítése érdekében fertőző ágensek. A hematopoietikus köldökzsinórvér transzplantációjának biztosítása érdekében minden vérmintát elsősorban hematogén fertőzések és genetikai betegségek esetén kell megvizsgálni. Egyes szerzők a különleges kiegészítő módszerek tanulmányozása köldökzsinórvér céljából diagnosztizálására genetikai betegségek, mint a thalassaemia és sarlósejtes vérszegénység, adenozin-hiány, agammaglobulinemia Bruton betegség Harlera és fogadók számára.

Az ajánlások szerint Ticheli L. és munkatársai (1998), az egyes mintákban a köldökvér szükséges számának meghatározására magvas sejtek, SB34-pozitív sejtek és a CFU-GM, szállítására HLA-tipizálás, hogy meghatározzuk a ABO vércsoport és Rh a tagságát. Ezen túlmenően, vetés hajtjuk bakteriológiai, szerológiai vizsgálatok a HIV és a CMV-fertőzés, a HBsAg, a hepatitis C, HTLY-I és HTLV-II (T-sejt leukémia, humán), szifilisz, toxoplazmózis. A cytomegalovírusra és a HIV fertőzésre vonatkozó polimeráz láncreakció kötelező.

A köldökzsinórvérzésre vonatkozó eljárást szigorúan az orvosi bioetika elveinek megfelelően kell elvégezni. A vérgyűjtés megkezdése előtt meg kell szerezni a várandós nő beleegyezését annak végrehajtásához. Előzetes beszélgetés a terhes nő tájékoztatáson alapuló beleegyezés megszerzéséhez elvégezni az összes műveletet, mivel a vér exfusion töltő és befejező dokumentumok végzik csak az egészségügyi szakemberek. Mindenesetre elfogadhatatlan Semmiféle ilyen eljárások személyzet biológiai, kémiai, gyógyszerészeti és egyéb nem egészségügyi oktatás, figyelembe véve az sérti a létrehozott normák bioetika és az emberi jogokat. A Pozitív hordozó HBsAg antitestek a kórokozója a hepatitis C, HIV és a szifilisz köldökzsinórvér nem vett, és az összegyűjtött vérmintákból már dobni, és elpusztult. Meg kell jegyezni, hogy a kocsi a látens fertőzések újszülöttek sokkal ritkább, mint a felnőttek, ezért a valószínűsége hematogén átadása és fejlesztése fertőzéses szövődmények vérképző infúziók köldökzsinórvér-sejtek szignifikánsan alacsonyabb, mint abban az esetben, csontvelő-transzplantációt felnőtt donorok.

Egy fontos pont alkalmazási köldökzsinórvér a klinikán az értékelést a graft, amelynek alapja a mennyiségi hematopoetikus őssejtek egy mintában a köldökzsinórvér-sejtek, és a dózisokat, amelyek szükségesek a transzplantáció. Az átültetéshez szükséges köldökzsinórvér-sejtek optimális számát még nem fejlesztették ki. Még általánosan elfogadott szempontok sem olyan rutin paraméterekre vonatkoznak, mint a CD34-pozitív sejtek és a CFU-GM száma. Egyes szerzők vizsgálták az esetleges hematopoietikus sejtek analízise alapján a hosszú távú kultúrák tartalmának meghatározása a telepképző egységek közös granulociták, eritrociták, monociták és megakariociták - CFU-GEMM.

Azonban klinikai körülmények között a köldökzsinórvér-átültetés standard értékelése magában foglalja csak a nukleált vagy mononukleáris sejtek számának meghatározását.

A köldökzsinórvér vérképzőszervi őssejtjeinek tárolása

Néhány probléma suschestvut és tárolási technológia vérképzési köldökzsinórvér sejteket. Amikor a krioprezerváció hematopoetikus őssejtek annak érdekében, hogy elérjék az optimális fagyasztási üzemmódban kell mennyiségének minimalizálására köldökzsinórvér és a vörösvértestek korábban eltávolított, hogy elkerüljék a hemolízis és a kockázat az inkompatibilitási reakció a vörösvértest-antigének (ABO, Rh). E célból a nucleated sejtek izolálására különböző módszerek alkalmazhatók. A korai 90-es a múlt század a legelterjedtebb módszer elválasztására magvas sejtek egy sűrűség gradiens alapján Ficoll, amelynek sűrűsége 1,077 g / ml, vagy perkolációs sűrűségű 1,080 g / ml. Válás köldökzsinórvér sűrűséggradiens lehetővé teszi, hogy kiválassza túlnyomórészt mononukleáris sejtek, hanem vezet jelentős veszteségeket a vérképző őssejtek - akár 30-50%.

A köldökzsinórvérsejtek izolálási folyamatában a hidroxi-etil-keményítő ülepedési hatékonyságát különböző módon becsüljük meg. Egyes szerzők rámutatnak, hogy a rossz minőségű a szétválasztás révén ez a módszer, más kutatók, éppen ellenkezőleg, az összes lehetséges módon előnyben szétválasztása köldökzsinórvér HSC használ 6% hidroxi-oldatot. Ez kiemeli a hemopoietikus sejtek üledékképzésének magas hatékonyságát, amely egyes adatok szerint 84% és 90% között van.

Támogatói egy másik szempontból úgy gondolja, hogy szinte minden frakcionálási eljárások egyaránt nagy veszteségeket yadrosoderzhashih sejtek és próbáljunk elválasztás centrifugálással, elválasztjuk a köldökzsinórvérből be 3 frakció: eritrocita, leukocita és a plazma gyűrű. A sejtek elkülönítése ezen a módon, a feltalálók azt találták, hogy a tartalom a mononukleáris sejtek a korai hematopoietikus progenitor sejtek és CD34 + immunfenotípusa végül volt rendre 90, 88 és 100% -a az eredeti szintre. Hasonló mennyiségű tisztított növekedés ez a módszer a köldökzsinór vérsejtek nyert más kutatók: ülepítés után sejtmaggal kiosztott 92%, 98% - mononukleáris, 96% - CD34-pozitív sejtek és a 106% a telepképző egységek.

Az 1990-es évek végén a zselatint széles körben alkalmazták üledékképző szerként. A klinikai gyakorlatban a zselatin segítségével a köldökzsinórvérből származó hematopoietikus őssejteket 1994 óta izolálják. Ha 3% -os zselatinoldatot használunk, akkor a nukleált sejtek izolálása hatékonysága eléri a 88-94% -ot. A zselatin széles körű alkalmazása a zsinórvér kialakulásában megerősítette előnyeit a többi ülepítőszerrel szemben. Összehasonlító elemzése az összes fenti izolálási eljárásait magvas sejtek szempontjából azok egymást követően történő alkalmazásra az egyes vizsgálati köldökzsinórvér minták azt mutatták, hogy az optimális sedimenter-out mononukleáris sejtek fenotípusának CD34 + / CD45 +, valamint a CFU-GM és a CFU-GEMM 3% zselatin oldatot. Ez szignifikánsan kevésbé hatásos módszerek Ficoll sűrűséggradiens, és a használata a metil-cellulóz és hidroxi-etil-keményítő, amelyben vérképző sejtek vesztesége elérte a 60%.

A köldökzsinórvér őssejt-transzplantációjának növekedése nem csak a termelés módszereinek fejlesztésével, hanem a tárolással is összefügg. Számos probléma merül fel közvetlenül a köldökvér készítéséhez a hosszú távú tároláshoz és a minta optimális krioprezervációs technológiájának megválasztásához. Ezek közé tartozik az elkülönítő eljárások kivitelezhetősége, a különféle krioprezerváló közegek alkalmazása, valamint a felengedett sejtek transzplantációra szolgáló módszerek alkalmazása. A köldökvér natív mintáinak szállítása gyakran a hematológiai központoktól távol eső régiókból történik. Ezzel összefüggésben a probléma a kábítószer vére tárolásának megengedett időtartamától függ, az átvétel időpontjától kezdve a krioprezerváció kezdetéig, ami különösen fontos a köldökvér-bankok kialakulásában.

A tanulmány a funkcionális aktivitásának hematopoietikus köldökzsinórvér-sejtek hosszú távú tárolása (12 éves), folyékony nitrogénben kiderült, hogy mintegy 95% -a hematopoietikus sejtek ez idő alatt nem veszítik el a nagy proliferatív képességgel. A papír Yurasova S. és munkatársai (1997) kimutatták, hogy a köldökzsinórvér szobahőmérsékleten tároljuk (22 ° C), vagy 4 ° C-on 24 és 48 óra elteltével nem csökkenti lényegesen a életképességét a hematopoietikus sejtek, hogy a kezdeti szint célszerűen 92 és 88%. Azonban, ha a tárolási idő 3 napra nő, akkor a vezetékvér életképes nukleált sejtjeinek száma jelentősen csökken. Ugyanakkor, más vizsgálatok során azt találták, hogy a tárolás során 2-3 napig hőmérsékleten 22 ° C-on vagy 4 elsődlegesen érintett életképességét érett granulociták, de nem vérképző sejtek.

Az életképesség köldökzsinórvér vérképzési őssejtek lehet negatív hatással a rendszer elemeinek hogy gyűjteményéhez. Elemzés a hatása a különböző véralvadásgátlók, amely hatásmechanizmus való kötődése miatt a kalcium-ionok (ACD, EDTA, XAPD-1) a hematopoietikus progenitor sejtek köldökzsinórvér tárolási körülmények között 24 és 72 óra feltárta a negatív hatása a életképességét magvas sejtek. Ebben az összefüggésben, a szerzők javasolják a használatát PBS (foszfát-puffer oldat) hozzáadásával a natív heparin tartósítószer nélküli koncentrációban 20 U / ml, amely, véleményük szerint, lehetővé teszi, hogy növelje a tárolás időtartama nem frakcionált köldökzsinórvér akár 72 órán át, és elmenti a funkcionális aktivitását telepképző egység. Azonban a tanulmány a védelmi CFU-GM és a CFU-G kimutatták, hogy a köldökzsinórvér tárolás előtt krioprezerválás nem haladhatja meg a kilenc órát. Nyilvánvaló, hogy ebben az esetben kell eljárnia az elvet, hogy ha van, egymásnak ellentmondó adatok használja az ajánlott minimális köldökzsinórvér eltarthatósági idő, és elkezd egy programozható fagyasztási izolált sejteket a lehető leggyorsabban.

A köldökzsinór vértestvérének fagyasztásakor 10% -os DMSO oldatot általában krioprotektánsként használnak. Mindazonáltal az expresszált krioprotektív hatás mellett a dimetil-szulfoxid ebben a koncentrációban közvetlen citotoxikus hatást fejt ki, még akkor is, ha a köldökzsinórvér véralakító sejtjeinek minimális expozíciója fennáll. A DMSO citotoxikus hatásának csökkentése érdekében alkalmazzák a nulla expozíciós hőmérsékletet, az összes manipuláció sebességét és a köldökzsinórminták felolvasztását követő ismételt mosogatást.

A Intézet Hematológiai és Vértranszfúziós Sciences Ukrajna alakul tudományos irányba 1995, amelynek célja egy olyan átfogó tanulmányt a köldökzsinórvér, mint alternatív forrása a hemopoetikus őssejtek. Különösen új technológiákat fejlesztettek ki a nem frakcionált és frakcionált köldökzsinórvér hemopoetikus sejtjeinek alacsony hőmérsékletű krioprezervációjára. Krioprotektánsként kis molekulatömegű orvosi polivinil-pirrolidont használnak. A nem frakcionált köldökzsinór vérének fenntartására szolgáló módszer a sejtek fagyasztás előkészítésének és a sejtszuszpenzió speciális kezelésének technikáján alapul, közvetlenül a transzplantáció előtt.

A krioprezervált hemopoetikus őssejtek funkcionális aktivitását befolyásoló egyik legfontosabb tényező a sejtszuszpenzió hűtési sebessége, különösen a kristályosodási fázis során. Programozott megközelítés a problémák a sebesség problémák és fagyasztással idő remek lehetőséget biztosít, hogy egy egyszerű és nagyon hatékony módszerek mélyhűtés, és anélkül, hogy a pénzt a fagyásvédőszer sejtszuszpenzióból transzplantációt megelőzően.

Az azonnali fagyás és felolvasztás szakaszai leginkább veszélyeztetik a sejtek életképességét az előállítás során. A hemopoietikus sejtek befagyasztásakor jelentős része elpusztulhat az intercelluláris közeg átmenetének pillanatától a folyadéktól a szilárd fázisú kristályosodásig. A sejthalál százalékának csökkentése érdekében krioprotektánsokat alkalmaznak, amelyek hatásmechanizmusát és krioprotektív hatékonyságát a tudományos szakirodalom megfelelően lefedi.

Egy ígéretes irány Optimization Techniques krioprezerváció csontvelő és köldökzsinór vérsejtek, hogy kombináljuk ugyanabban az oldatban, hogy alacsony koncentrációjú krioprotektív több különböző hatásmechanizmusú, például ható intracelluláris szintjét DMSO és hidroxi-etil-keményítő, vagy az albumin rendelkező extracelluláris bezáró hatása.

Mélyhűtés köldökzsinórvér sejteket hagyományosan használt 20% -os DMSO-oldatot, amely mechanikailag szilárdan keverés közben jeges fürdőn, lassan öntjük a sejtszuszpenzióhoz, hogy az egyenlő (1: 1) térfogat aránya és a sejtszuszpenziót a hidegkárosodásgátló. A dimetil-szulfoxid végkoncentrációja 10%. A sejt-szuszpenziót lehűtjük egy programot sebességgel krioustanovke HS / perc -40 ° C, amely után a hűtési sebességet növeljük, 10 ° C / perc. Miután elérte a -100 ° C-ot, a tartályt a sejtszuszpenzióval folyékony nitrogénbe helyeztük (-196 ° C). Ezzel a krioprezerválással a felengedés után a funkcionálisan aktív mononukleáris sejtek biztonsága eléri a kiindulási szint 85% -át.

Módosítások krioprezerváció technikák csökkentését célzó a DMSO koncentrációja hozzáadásával hidroxi-etil-keményítő (a DMSO-végkoncentráció, és hidroxi-etil-keményítő, illetve 5 és 6%). A krioprotektánsok ezen kombinációjának magas hatékonyságát megfigyeljük, amikor a mieloid sejtek szuszpendálása fagyott, kevesebb citoprotekcióval, mint egyetlen dimetil-szulfoxid 10% -os oldatával. Az életképes nukleált sejtek száma elérte a kiindulási szint 96,7% -át, és a CFU-GM számával becsült funkcionális aktivitása 81,8% volt.

Amikor a dimetil-szulfoxid-oldatot koncentrációban 5-től 10% kombinációban 4% hidroxi-etil-keményítő (végső koncentráció) megállapította, hogy a megőrzése CD34-pozitív sejtek ezeket a tartományokat dimetilszulfoxid gyakorlatilag változatlan. Ugyanakkor a körülmények között csökkenti a DMSO koncentrációja 5-2,5% figyelhető tömeges halált köldökzsinórvér sejtek - az életképes sejt egységek csökken 85,4-12,2%. Más szerzők szintén arra a következtetésre jutott, hogy ez volt az 5. és a 10% -os dimetil-szulfoxid (a szerzői kiviteli alakban - kombinálva autológ szérummal) maximális hatékonysággal szövetvédő hatásúak során krioprezervációja köldökzsinórvér HSC. Ezen túlmenően, a magas biztonsági egymás után lefagyasztjuk és felolvasztjuk sejt van jelölve abban az esetben kombinációja 5 vagy 10% -os DMSO-4% hidroxi-etil-keményítő oldat, különösen egy szabályozott hűtési sebességgel TOS / perc. Egy másik felhasznált papír krioprotektív oldat, amely három összetevők már - DMSO, tisztított humán albumin és RPMI médiumban egy arány 1: 4: 5, amely adunk a sejtszuszpenzióhoz akár azonos térfogatú arányok (végső DMSO-koncentráció 5%). 4 ° C-os vízfürdőn történő leolvasztás után a CFU-GM biztonságossága meghaladta a 94% -ot.

Egyes szerzők azt javasolják, hogy nem frakcionált köldökvért használnak a krioprezervációhoz, mivel a vörösvérsejtek eltávolítása során jelentős mennyiségű vérképzőszervi sejt elvész. Ebben a kiviteli alakban dimetil-szulfoxid 10% -os oldatát alkalmazzuk a mononukleáris sejtek védelmére a kriokristályosítás káros hatásaival szemben. A fagyasztást a HS / perc -80 ° C állandó hűtési sebesség mellett végezzük, majd a köldökzsinórvérsejtek szuszpenzióját folyékony nitrogénbe merítjük. Ezzel a fagyasztási módszerrel a vörösvérsejtek részleges lízisére kerül sor, ezért a vérminták nem igényelnek frakcionálást. A felolvasztás után a sejtszuszpenziót a szabad hemoglobinból és a dimetil-szulfoxidból emberi albuminnal vagy a beteg autológ szérum-tartalmával mossák, és transzplantálásra használják.

Megőrzése a vérképző őssejtek kiolvasztás után nem frakcionált köldökzsinórvér valóban magasabb, mint a frakcionált, de kapcsolatban krioustoychivostyu a vörösvértestek is komoly problémákat okozhat eredményeként a transzfúzió utáni transzfúzió ABO-kompatibilis vörösvértestek. Ezenkívül jelentősen megnő a tárolt frakcionált vér mennyisége. Klinikai szempontból, még előnyösebben mélyhűtés előzőleg izolált és tisztított egyéb sejtfrakciójában köldökzsinórvér hematopoietikus sejtek.

Közelebbről, a módszer mélyhűtési köldökzsinórvér sejtekből frakcionáltuk, amely lehetővé teszi az eritrociták eltávolítása a fagyasztás előkészítésénél, amely egy 6% -os hidroxi-etil-keményítő a készítményben plazmozameshchath oldatot „Stabizol”. Felolvasztás után az így kapott sejtszuszpenzió további manipuláció nélkül kész klinikai felhasználásra.

Így jelenleg a köldökzsinór vérének krioprezervációjával nagyon sok hatékony módja van. A fő különbség az, hogy a vérmintákat frakcionálják vagy frakcionálják a sejtfrakciókba az előkészítési szakasz alatt, és a begyűjtött nukleált sejteket a vörösvérsejtek keverése nélkül.

A köldökzsinórvér hemopoetikus őssejtjeinek átültetése

A 80-as évek végén - a múlt század 90-es évek elején - azt találták, hogy a magzatot a terhesség alatt a köldökzsinórvérrel a vérképzõ õssejtek magas tartalma jellemzi. A köldökzsinórvérsejtek viszonylagos egyszerűsége és a nyilvánvaló etikai problémák hiánya elősegítette a zsinórvér őssejtek használatát a gyakorlati orvoslásban. A cordov vér Fanconi anémiával szenvedő gyermekének első sikeres átültetése kiindulópontként szolgál a köldökzsinórvérsejt-transzplantáció térfogatának növelésére és a banki ellátás biztosítására. A Cord Blood Bankok globális rendszerében a legnagyobb a Placental Blood New York Center, amely az Országos Egészségügyi Intézetek mérlegén áll. A bankban tárolt vérminták száma megközelíti a 20 LLC-t. A recipiensek száma (főként a gyermekek) is növekszik, és sikeres átültetést végeztek. Az Egyesült Államok Egészségügyi Minisztériuma szerint a HSC-kórokozó vese recipiensének a poszttranszplantációs életének visszaesésmentes periódusa már meghaladta a 10 évet.

Ez nem meglepő, hiszen számos tanulmány a vérképző potenciális köldökzsinórvér kimutatták, hogy a mennyiségi és minőségi legkorábbi őssejtek nemcsak nem rosszabb, mint egy felnőtt emberi csontvelőből, hanem néhány intézkedést haladja meg. A magasabb szaporodási potenciálját köldökzsinórvér őssejtek okozott fejlődési sejt jelátviteli funkciók, jelenlétében receptorok HSC-ket specifikus növekedési faktorok, a kapacitás a köldökzsinórvér sejtek autokrin növekedési faktorok termelésével, a nagy méret és hossza telomerek.

Így genomi és fenotípusos jellemzői a vérképző őssejtek köldökzsinórvérből meg előre minőségű megtapadását nagy potenciális donor vérképzési fellendülés a címzett.

A köldökzsinór vérének hematopoietikus őssejtjeinek előnyei

Között az igazi előnyeit használja vérképzési köldökzsinórvér őssejtek transzplantációja több más forrásból a vérképző sejtek meg kell jegyezni, szinte nulla egészségi kockázatot a donor (ha nem tekintik olyan placenta), míg így nincs szükség az általános érzéstelenítés. A használata köldökvér sejt transzplantáció tágul részben HLA-kompatibilis graft rendszer (összeférhetetlenséggel egy-három antigének). A technika a hosszú távú tárolás a hematopoetikus köldökzsinórvér sejteket fagyasztott állapotban, ami növeli a valószínűsége megszerzésének ritka HLA-típusú, és csökkenti a keresési időt HLA-egyező allogén transzplantáció. Ugyanakkor az átviteli útvonal által továbbított latens fertőzések kialakulásának kockázata jelentősen csökken. Ezenkívül van egy olcsó biológiai életbiztosítási forma, amely összefügg azzal a lehetőséggel, hogy a köldökzsinórvérsejteket autológ transzplantációra használják.

Azonban, mivel a kis mennyiségű vér, hogy lehet gyűjteni a méhlepény (átlagosan nem több, mint 100 ml), hogy előtérbe a problémát, hogy elérjük a lehető legnagyobb mennyiségű vér a köldökzsinórból nyert véna szigorú feltételek betartását minimális baktériumfertőzés kockázata köldökzsinór vérből származó mintákat.

Primitív hematopoietikus sejtek köldökzsinórvér általában jelenléte alapján azonosítjuk a felszínükön glikofosfoproteina CD34, és az alapján a funkcionális tulajdonságaik vizsgálatával klonogén vizsgálati eljárással vagy in vitro telepképződése. Összehasonlító elemzése azt mutatta, hogy a köldökzsinórvér és csontvelő maximális tartalma CD34-pozitív mononukleáris sejtek a frakció rendre 1,6 és 5,0%, a maximális szintje telepképző egység egy szubpopulációjában CD34 + sejtek - 80 és 25%, a teljes klónozási hatékonysága CD34 + -sejteket - 88 és 58%, a maximális telepképző sejtek nagy proliferatív potenciálú (HPP-CFC szaporodást -populyatsii CD34 +) - 50 és 6,5%. Meg kell hozzá, hogy a klónozási hatékonysága CD34 + CD38-sejtek, és a képes reagálni a citokin stimuláció szintén magasabb hematopoietikus őssejtek a köldökzsinórvér.

Kombinációs fenotípusos antigének Thy-1, CD34 és CD45RA megerősíti a magas proliferatív kapacitás a köldökzsinórvér hematopoietikus sejtek, és a kifejezés a három felületén antigének a köldökzsinór-vérsejteket jelzi, hogy tartoznak az őssejt. Ezenkívül megállapítást nyert, hogy a köldökzsinórben olyan CD34 + fenotípusú sejtek vannak, amelyek nem tartalmaznak lineáris differenciálódási markert. A sejtpopulációk köldökzsinórvérének szintje a CD34 + / Lin fenotípusos profiljával a CD34-pozitív sejtek összes számának 1% -a. Hemopoetikus progenitor sejtek vezetnek a köldökzsinórvér, mint egy limfoid sejtvonalak, és egy sor lineáris pluripotens myeloid sejtek differenciálódását, ami azt is jelzi, hogy tartoznak az őssejtek.

Amint már említettük, a csontvelő és a köldökzsinór közötti lényeges különbségek az átültetésre használt hematopoetikus sejtek mennyisége. Amikor csontvelő-transzplantáció elvesztése sejttömeget elválasztási eljárás, mélyhűtés, felolvasztás és a tesztelés megengedett tartományban 40-50%, a zsinór vérsejtek, mint veszteség nagyon jelentős, hiszen ha a nem elegendő számú HSC transzplantáció lehet tarthatatlan. Szerint G. Kogler és munkatársai (1998), a sejt transzplantáció a recipiensben testtömege 10 kg potenciális transzplantátum (teljes száma az összegyűjtött köldökzsinórvér minták - 2098) lehet az összes köldökzsinórvér minták, testsúly 35 kg - 67%, és csak a A minták 25% -a képes hatékony transzplantációt biztosítani olyan betegeknél, akik testtömege 50-70 kg. Ez a klinikai helyzet azt mutatja, hogy szükség van, hogy optimalizálja és hatékonyságának javítása érdekében a meglévő mintavételi módszerek, szaporodás és tárolása köldökzsinór vérsejtek. Ezért a kérdéseket a szabványosítás olyan mintavételezési módszerek, tesztelés, elválasztása és mélyhűtés köldökzsinórvér ma már széles körben tárgyalja a szakirodalom létrehozására vér bankok, annak használata a klinikán, valamint létrehozó feltételek és a tárolás szempontjából a hematopoetikus őssejtek köldökzsinórvér.

[7], [8], [9],

A köldökzsinór vérének hematopoietikus őssejtjeinek használata a gyógyászatban

Általában köldökzsinórvérből izolálható akár 10 ⁶ hematopoetikus őssejtek, ritkán több. Ezért a mai napig nyitott kérdés marad, hogy megfelelõ összeg a köldökzsinórvér vérképzési őssejtek visszaállítani vérképzésben felnőtt címzett. Vélemények megosztottak ebben a kérdésben. Egyes kutatók úgy vélik, hogy ez az összeg elegendő transzplantáció gyermekek, de túl kicsi ahhoz, hogy transzplantáció felnőtt ember, amelyre a beadás optimális (7-10) × 10 ⁶ CD34-pozitív sejtek per 1 kg testtömeg - átlagosan 7 × 10 ⁸ egy transzplantáció. Ezekből a számításokból, hogy a köldökzsinórvér minta tartalmaz 700-szor kisebb, mint a hematopoietikus őssejtek, mint szükséges transzplantáció egy felnőtt beteg. Azonban egy ilyen mennyiségi értékelés készül analógiájára számú csontvelő sejtek transzfundált és teljesen figyelmen kívül hagyja a fejlődési jellemzőket vérképzésre.

Különösen azt nem veszi figyelembe azt a magasabb szaporodási képességét hematopoietikus őssejtek a köldökzsinórvér képest hematopoietikus progenitor sejtek a csontvelőben. Az eredmények in vitro telepképző potenciális arra utalnak, hogy egyetlen adag nyújthat köldökzsinórvér vérképzési regenerációra felnőtt címzett. Másrészt, nem szabad elfelejteni, hogy a szám a HSC-k csökken még a folyamat az embrionális fejlődés: a tartalom CD34-pozitív sejtek a köldökzsinórvér lineárisan csökken 5 alkalommal egy időszak 20 hetes (vér a tanulmány kapjuk idő előtti megszűnése esetén a terhesség), hogy 40 hét gesztációs (a fiziológiai munkaerő), kíséretében paralellno folyamatosan növekvő lineáris citodifferenciációs expressziós markereket.

Hiánya miatt a standardizált megközelítés mennyiségi köldökzsinórvér mintákban progenitor sejtek vita az optimális adag a vérképző őssejtek köldökzsinór vérből folytatódik. Egyes kutatók úgy vélik, hogy azok a kritériumok kiválasztását köldökzsinórvér minták használhatók a magvas sejt és a mononukleáris sejtek, újratervezi a címzett testsúly, azaz a dózist. Egyes szerzők úgy vélik, hogy a CD34 + sejtek minimális mennyiségi küszöbe, még a HSC autológ transzplantációjának is 2 x 10 ⁶ / kg. A növekedés a dózis a hematopoietikus sejtek 5 × 10 ⁶ sejt / kg (összesen 2,5) már biztosít egy több alkalmas transzplantáció utáni korai időszakban, csökkenti előfordulásának fertőzéses szövődmények és lerövidíti az időszak a megelőző antibiotikum-terápia.

Szerint E. Gluckman és munkatársai (1998) a hematológiai sikeres transzplantációja köldökzsinór vérsejtek ez a bevezetése legalább 3,7 × 10 ⁷ magvas sejtek per 1 kg testtömeg. Adagjának csökkentésével a hematopoetikus őssejtek 1 × 10 ⁷ vagy annál kevesebb a magvas sejtek per 1 kg testsúly, a beteg kockázatát graftelégtelenség kiújuló daganatok vér drámaian növekszik. Fel kell ismerni, hogy a GSG allotranszplantáció után a hemopoízis gyors visszaszerzéséhez szükséges progenitor sejtek minimális száma még nem ismert. Elméletileg ez alkalmazásával lehet elérni egyetlen sejt, de a klinikai csontvelő-transzplantáció gyors és stabil megtapadás garantált transzfúziós legalább (1-3) × 10 ⁸ magvas sejtek per 1 kg beteg testtömeg.

Az oncohematológia optimális HSC-mennyiségének meghatározására egy nemrégiben készült részletes tanulmány a három transzplantációs anyag CD34-pozitív sejtjeinek függvényében izolált három csoportba tartozó betegek megfigyelését is magában foglalta. Az első csoport betegei (3-5) x 10 ⁶ sejt / kg-ot kaptak . GSK dózis betegeknél a második csoport elérte a (5-10) × 10 ⁶ sejt / kg, és a harmadik csoport a betegek transzplantált több mint 10 x 10 ⁶ CD34 + sejt / kg. A legjobb eredményeket figyeltük meg a transzplantált betegek csoportjában, ahol a CD34-pozitív sejtek száma (3-5) x 10 ⁶ / kg volt. Az átültetett sejtek dózisának növekedése 5 × 10 ⁶ / kg fölött nem mutatott statisztikailag szignifikáns előnyöket. Így nagyon nagy tartalmat HSC-k a transzplantátum (> 10 x x 10 ⁶ / kg) társított jelentős mennyiségű maradék reinfusion tumorsejtek, ami a betegség kiújulása. A transzplantált allogén progenitor sejtek száma és a "graft versus host" reakció között nem volt közvetlen kapcsolat.

A HSC zsinórvér átültetésének felhalmozott tapasztalata megerõsíti a magas repopulációs potenciáljukat. A köldökzsinórvér transzplantációjának kötődési sebessége korrelál a bevezetett nukleált sejtek számával. A legjobb eredményeket 3 × 10 ⁷ / kg transzplantációval figyelték meg , míg a csontvelő esetében ez a dózis 2 × 10 ⁸ / kg. A koordinációs központok adatai szerint 2000 végén 1200 köldökvérsejt-transzplantátumot állítottak elő a világon, főként az adományozó rokonaiból (83%). Nyilvánvaló, hogy a köldökzsinór a csontvelő alternatívájaként tekinthető hemoblastosisos betegek transzplantációjára.

Azonban, neonatális természetét Cordova forrása hematopoetikus szövet ösztönzése jelenléte miatt a funkcionális jellemzőit a GCW. Azonban csak a klinikai tapasztalat adhat választ arra a kérdésre, megfelelőségének minta köldökzsinórvér felnőtt vérképzési regenerációra a címzettnek aplasiája vérképzésre. Transzplantációs köldökzsinórvér sejtekből használják kezelésére számos betegség tumor és a nem-tumor jellegű: leukémiák és myelodysplasiás szindrómák, non-Hodgkin-limfóma, és neuroblasztóma, aplasztikus anémia, veleszületett Fanconi anaemia és gyémánt fekete ventilátor, hiányossága a leukocita adhézió Barr-szindróma, Gunther betegség Harlera szindróma, talasszémia .

A szoros figyelem és a különálló kutatások megérdemlik a köldökzsinórvér vérformáló sejtjeinek transzplantációjának immunológiai vonatkozásait. Az eredmények azt mutatják, hogy abban az esetben, transzplantációja köldökzsinórvér őssejtek donorokból származó hiányos HLA-egyező transzplantációs eredmények meglehetősen kielégítő, hogy, a szerzők szerint, jelezve alacsonyabb immunreaktivitást köldökzsinórvér, mint a csontvelő.

A részletes tanulmány a celluláris összetételét köldökvér megmutatta jellemzői mindkét fenotípus spektrumú effektor sejtek az immunrendszer, és azok funkcionális aktivitását, amely lehetővé teszi, hogy úgy köldökzsinórvér forrásként HSC-k viszonylag alacsony, a reakció kockázata „graft-versus-host”. További jellemzők funkcionális éretlensége immunitású köldökzsinórvért kell jegyezni egyensúlytalanság a citokin termelés és érzékenységének csökkenése a citokinek új szabályozás az immunválaszt. A citotoxikus limfocita aktivitás gátlását olyan tényezőnek tekintik, amely hozzájárul az átültetett hemopoetikus szövet immunológiai toleranciájának kialakulásához. A köldökzsinórvér-limfocita populációban, szemben a felnőtt adományozók perifériás vérével és csontvelőjével, az inaktív, éretlen lymphocyták és szuppresszor sejtek dominálnak. Ez azt jelzi, hogy csökken a zsinórvér T-limfociták elérhetősége az immunválaszt. A köldökzsinórvér monocyta populációjának egyik fontos jellemzője a funkcionálisan teljes és aktív antigénbemutató sejtek alacsony tartalma.

Egyrészt, az alacsony fokú érettség effektor sejtek az immunrendszer köldökzsinórvér leolvasott kiterjed annak alkalmazását a klinikán, mivel ezek a jellemzők lehetővé teszik a intenzitásának csökkenését immun konfliktus a donor és a recipiens sejtek. De másrészt tudjuk, hogy létezik a korreláció mértéke reakció „graft versus host betegség” és a transzplantációs tumorellenes hatást, vagyis a hatása fejlesztése „graft-versus-leukémia”. Ennek kapcsán tanulmányt végeztünk a köldökzsinórvér daganatellenes citotoxicitásáról. Az eredmények azt mutatják, hogy annak ellenére, hogy nagyon legyengült immunrendszer válasza a köldökzsinórvér-sejtek antigén stimuláció, aktiválódnak az első helyen a természetes ölősejtek és killeropodobnymi sejtek, amelyek aktívan részt vesznek a végrehajtási mechanizmusokra az anti-tumor toxicitási. Sőt, a köldökzsinórvér limfocita szubpopulációk találtak a fenotípus CD16 + CD56 + és a CD16 „TCRa / p +. Feltételezzük, hogy ezek a sejtek aktivált formában hajtsák végre reakció” graft-versus-leukémia”.

Az Onkológiai Intézet, Orvostudományi Akadémia Ukrajna krioprezervált vérképző sejtek köldökzsinórvér adták rákos betegek tartós hypoplasia vérképzés miatt kemoterápia és sugárkezelés. Ezeknél a betegeknél, transzplantáció a vérképző őssejtek köldökzsinórvér helyreállította vér elnyomást, amint azt a tartós emelkedése érett alakos elemei a perifériás vérben, valamint a növekedése jellemző mutatókat állapotában a celluláris és humorális immunitás. A köldökzsinórvér vérátalakító sejtjeinek átültetése után az újratelepítési hatás stabilitása lehetővé teszi a folyamatos sugárkezelést és a kemoterápiát, anélkül, hogy a kezelést megszakítanák. Bizonyíték van arra, a nagyobb hatékonyság allograft őssejt köldökzsinórvér rákos betegek: az éves kiújulás kockázata egy tumor azok használatát 25% volt, szemben a 40% betegeknél az átültetett allogén csontvelő-gén.

A hatásmechanizmus mélyhűtött köldökzsinórvér őssejtek kell tekinteni, mint az eredménye humorális stimuláció vérképzés címzettek által okozott különleges képessége újszülött sejtek autokrin termelését vérképzési növekedési faktorok, valamint ennek következtében az ideiglenes megtapadását donor sejtek (például egy megerősítő - jelentős növekedése a tartalom a perifériás vérben a magzati hemoglobin címzett 7-15 napon transzfúzió után, a kiindulási értékhez képest). Hiánya címzettek köldökzsinórvér transzfúzió utáni reakciók - következtében a relatív tolerancia immunsejtek, valamint a bizalom kritérium hasznosságát krioprezervált biológiai anyag.

Progenitor sejteket T-limfociták gyilkos köldökzsinórvér képes aktiválódni hatása alatt exogén citokin stimuláció hogy használják, hogy új ex vivo és in vivo módszerekkel indukálására anti-tumor citotoxikus limfoid sejtek későbbi transzplantáció immunterápiában. Ezen túlmenően, a „éretlensége” a genom a köldökvér immunsejtek lehetővé teszi azok használatát fokozására tumorellenes aktivitást molekuláris modellezéssel.

Napjainkban a köldökzsinór széles körben alkalmazható elsősorban a gyermekgyógyászati hematológiában. A gyermekek akut leukémia allotranszplantációja hematopoietikus őssejtek a köldökzsinórvér képest csontvelő allograftok, jelentősen csökkenti előfordulásának reakció „graft-versus-host”. Azonban meg kell jegyezni, hosszú időn keresztül a neutropenia és thrombocytopenia, és sajnos, a magasabb szintű a 100 napos mortalitás a transzplantációt követően. Egy hosszabb hasznosítási a perifériás vérben a granulociták és trombociták oka lehet a nem megfelelő differenciálás egyes szubpopulációk a CD34 pozitív sejtek a köldökzsinórvér, amint azt az alacsony szintű abszorpciós radioaktív rodamin és alacsony expressziót a CD38 antigének a felületükön.

Ugyanakkor, a transzplantáció a vérképző őssejtek a köldökvér felnőtt betegek, végre hiánya miatt egyaránt kompatibilis nem rokon csontvelő donor, valamint a lehetőségek mobilizálására autológ HSC kimutatta magas éves relapszus-betegeknek a túlélési 30 év alatti év (73%) . Tágulási recipiens korosztály (18-46 év) csökkent a túlélés 53%.

Mennyiségi elemzése sejtek fenotípusának CD34 + csontvelőből és köldökzsinór vérből magasabb volt (3,5-szeres) tartalmuk a csontvelőben, de a köldökzsinórvérből szignifikáns túlsúlya sejtek fenotípusos profilját CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR szaporodnak aktívabb, mint sejtek immunfenotípusa CD34 + HLA-DR +, megerősített kísérleti tanulmányok a növekedés a hosszú távú tenyészet hematopoietikus sejtek in vitro. Primitív sejt progenitorok a fenotípus CD34 + CD38 szereplő kábelt vérben és a csontvelőben, de köldökzsinór vérsejtek a marker meghatározott CD34 + CD38 magasabb klonogén aktivitás, mint a vérképző sejtek az azonos fenotípus, izolált felnőtt donor csontvelő. Ezen túlmenően, köldökzsinór vérsejtek CD34 + CD38 immunfenotípusa fog adott válaszban megnyilvánuló proliferációs stimulációs citokinekkel (IL-3, IL-6, G-CSF), és szaporodnak 7-szer több kolónia a hosszú távú kultúrák, mint a csontvelő sejtek.

A köldökzsinórvér őssejtjeinek bankjai

A megfelelő fejlődését az új terület a gyakorlati orvoslás - transzplantációja köldökzsinórvér őssejtek, valamint hogy végezzen transzplantáció a vérképző csontvelő őssejtek, szükség van egy kiterjedt vér bankok, amelyek már kialakult az Egyesült Államokban és Európában. A zsinórvér-bankok államon belüli hálózatát a Netcord Bankok Szövetsége egyesíti. A megvalósíthatóságát nemzetközi szövetsége köldökzsinórvér bank határozza meg, hogy az, hogy végre független transzplantációk szüksége van egy nagy számú minta köldökzsinórvér gépelt, amely lehetővé teszi, hogy válasszon a HLA-azonos donor. Csak a különböző HLA-típusok vérmintáinak raktározásával rendelkező bankok létrehozása igazán megoldhatja a szükséges donor megtalálásának problémáját. A cord blood bankok ilyen rendszerének megszervezése megköveteli az etikai és jogi normák előzetes fejlesztését, amelyek jelenleg nemzetközi szinten tárgyalandók.

A krónikus vérbankok létrehozásához Ukrajnában számos rendelkezést és dokumentumot kell kidolgozni.

Először is ezek a kérdések a mintavétel, a frakcionálás és a köldökzsinór vérének megfigyelésének szabványosításával kapcsolatos kérdések. Meg kell, hogy szabályozza a köldökzsinór vérvétel szabályok kórházakban, követelményeivel összhangban az orvosi etika, hogy meghatározzuk a minimális köldökzsinórvérből, amely a sikeres transzplantációt. Meg kell összehasonlítani, és a szabványosítás különböző szempontok minőségértékelés és a szám a vérképző őssejtek, valamint HLA-tipizálási módszerek és diagnosztikai módszerek a genetikai és a fertőző betegségek átvihető az infúzió köldökzsinór vérsejtek meghatározott kiválasztási szempontok egészséges donorok. Szintén érdemes megvitatni a szérum, a sejtek és a zsinór véréből származó különálló tárolóhelyeket.

A csontvelő-donorok nyilvántartásaival való kapcsolatfelvételhez feltétlenül szükséges a kábeltévé adatok számítógépes hálózatának kialakítása. A sejt-transzplantáció továbbfejlesztéséhez speciális protokollokat kell kifejleszteni a HLA-azonos rokonoktól és a nem kapcsolódó donoroktól származó cordvér és csontvelő transzplantáció eredményeinek összehasonlítására. A foglalkozó etikai és jogi problémákat a klinikai alkalmazása a köldökzsinórvér-sejtek segítségével egységesíteni dokumentációt, beleértve a beleegyező nyilatkozat a szülők, valamint a nyilatkozat az anya vagy a rokonok a gyermek által azonosított genetikai és / vagy fertőző betegségek.

A meghatározó feltétele a fejlődésnek a transzplantációval Ukrajna lesz az elfogadása Nemzeti Programja az adományt az őssejtek és a nemzetközi fejlesztési együttműködés más országokban a World Association of donor csontvelő (WMDA), a Nemzeti US donor csontvelő programot (NMDP) és egyéb nyilvántartások.

Általánosítva is rövid története a vérképző őssejt-transzplantáció a köldökzsinórvérből, tudomásul vesszük, hogy az első feltételezése lehetőségét klinikai alkalmazása köldökzsinórvér készült a '70 -es évek elején, megerősítették a 80 év a kísérleti vizsgálatok eredményei állatokban és 1988-ban évben került sor a világ első transzplantáció a vérképző sejtek humán köldökzsinórvérből, majd kezdett kialakulni egy globális hálózat a köldökzsinórvér bank. 10 év után, a betegek száma transzplantált hematopoietikus sejtek, köldökzsinór-vérből közelebb 800. Köztük voltak betegek különböző daganatos betegségek (leukémia, limfóma, szilárd tumorok) és a nem-tumor (veleszületett immunhiány, vérszegénység, összefüggő betegségek anyagcserezavarok) jellegét.

A zsinórvérben a korai és elkövetett sejtproteinek tartalma nagyobb, mint egy felnőtt perifériás vérében. Száma granulocita-makrofág telepképző egységek és azok szaporodási potenciálját köldökzsinórvér sokkal nagyobb, mint a perifériás vérben a felnőttek, beadása után még növekedési faktorok. A hosszú távú sejtkultúrák in vitro körülmények között a köldökzsinórvérsejtek nagyobb proliferatív aktivitását és életképességét mutatták, mint a csontvelő-sejtek. A kritikus pillanatok a transzplantáció a köldökvér őssejtek hematopoietikus potenciál számát, és a magvas sejteket, jelenlétében citomegalovírus fertőzés, HLA-kompatibilis donor és a recipiens, testtömegétől és a beteg életkorától.

Mindazonáltal a köldökzsinórvér őssejt-transzplantációját a csontvelő-transzplantáció alternatívájaként kell tekinteni, különösen súlyos vérképzőszervi megbetegedések kezelésére, különösen gyermekek esetében. Klinikai problémák transzplantációja köldökzsinór vérsejtek fokozatosan megszűnt - van már elég hatékony mintavételi technikák, elválasztása és mélyhűtés köldökzsinórvér sejtekből, feltéve, hogy a szükséges feltételek kialakulását köldökzsinórvér bankok, a vizsgálati módszerek javul magvas sejt. Optimális szétválasztás során a nagy léptékű előminta köldökzsinórvér haematopoeticus stem sejtek létrehozása bankokat kell tekinteni, mint egy 3% -os zselatinoldatot és 6% hidroxi-etil-keményítő oldat.

Perehrestenko P. és munkatársai (2001) helyesen rámutatnak, hogy az átültetésre a köldökzsinórvér őssejtek esetében elfoglalja jogos helyét a komplex terápiás intézkedések leküzdeni a depressziót a vérképzés különböző eredetű, a GSK köldökzsinórvér különböznek számos jelentős előnye van, amelyek között fontos, hogy viszonylag könnyű a betakarítás, nincs kockázat a donor, alacsony szennyezettsége újszülött sejtek a vírusok és viszonylag olcsó a transzplantáció. Egyes szerzők szerint a transzplantáció köldökzsinór vérsejtek ritkábban, mint a csontvelő sejtek kíséri kapcsolatos komplikációk a reakció a „graft-versus-host”, ami annak köszönhető, hogy véleményük, gyenge expresszió köldökzsinórvér sejteket HLA-DR antigének és azok éretlenség. Mindazonáltal a fő populációját magvas sejtek köldökvér vannak a T-limfociták (SDZ-pozitív sejtek), amelynek tartalma körülbelül 50%, ami 20% -kal kevesebb, mint a perifériás vér egy felnőtt, de a fenotípusos különbségeket a szubpopulációk a T-sejtek ezekből források elhanyagolhatók.

A tényezőket, amelyek közvetlenül befolyásolják a túlélést az őssejt-transzplantáció a köldökzsinórvérből, meg kell jegyeznünk, a betegek életkora (a legjobb eredmény látható címzettnek a legfeljebb 5 év), a korai diagnózis, a betegség és a forma leukémia (hatékonyság jelentősen magasabb az akut leukémia). Nagyon fontos a nucleated köldökzsinór vérsejtjeinek dózisa, valamint a recipienssel való HLA kompatibilitásuk. Nem véletlen, elemzése klinikai hatékonyságát köldökzsinórvér transzplantációja GSK Onkológiai és Hematológiai mutatja a legjobb eredményeket a kezelés alkalmazásával kapcsolatban átültetések: egyéves betegségmentes túlélés ebben az esetben eléri a 63%, míg a független szervátültetés - csak 29%.

Így a jelenléte nagy számú őssejtek köldökzsinórvérből és a magas repopulyatsionnaya képessége újszülött vérképző őssejteket, hogy azok alkalmasak az allogén transzplantációra betegeknél hematológiai rosszindulatú. Jegyezzük meg, hogy a visszatérés a vérképzés transzplantáció után a vérképző őssejtek köldökzsinórvérből „megnyújtjuk idő”: helyreállítása tartalmat neutrophil szám a vérben általában akkor fordul elő vége felé a 6. Héten, és thrombocytopenia jelenség eltűnik, általában 6 hónap után. Ezen túlmenően, az éretlen vérképző sejteket a köldökvér nem zárja ki immunológiai konfliktus: súlyos során az akut és krónikus reakció „graft versus host” megfigyelt rendre 23 és 25% a címzettek. Relapszusait akut leukémia a végén az első évben kiültetés után köldökzsinór vérsejtek találhatók 26% -ában.

[10], [11]