Immunológiai kutatások az urológiában

Az immunográfiának az urológiai betegbe történő beosztása azt jelenti, hogy a résztvevő orvos az immunrendszer zavarait veszi alapul. Ismétlődő bakteriális, vírusos, gombás fertőzések, allergiás reakciók, szisztémás betegségek tünetei lehetnek az ilyen rendellenességek, amelyeket az jellemez, számos szindrómák (fertőzés, rák, allergiás, autoimmun, limfoproliferatív). Egy betegnek több szindróma is lehet. Például, krónikus fertőző betegségek (fertőző szindróma) okozhat immunhiányos és immun hiány lehet nyilvánul hajlam, hogy a fertőző betegségek és a rák (Cancer szindróma). A fertőzésekre való hajlam előfordulhat a másodlagos immunhiány hátterében, amely egy limfoproliferatív betegség, például leukémia következtében alakul ki. Az immunrendszer kóros elváltozásainak három fő csoportja van:

• az immunitás egy vagy másik kapcsolatának mennyiségi vagy funkcionális elégtelensége, amely immunhiányos állapot kialakulásához vezet;
• az antigénnek az immunrendszer általi elismerésében való megsértése, ami az autoimmun folyamatok kialakulásához vezet;
• hiperreaktív vagy "perverz" immunválasz, amely allergiás betegségek kialakulásával nyilvánul meg.

Vannak szűrések (tesztek az 1. Szint) és a minősítés (tesztek a 2 szint) módszerek immunodiagnosztika. Az előbbiek léteznek az immunrendszer megsértéseinek megállapítására, az utóbbiak - a végrehajtásukhoz kapcsolódó mechanizmusok meghatározására további immunkorrekció céljából.

B-sejt-immunhiányos kapcsolat

Szűrési módszerek

• Meghatározása a relatív és abszolút száma B-limfociták révén immunfluoreszcenciával vagy áramlási citometriával a B-sejt-antigének (CD19, CD20, ahol CD - differenciálódási klaszter). A B-limfocita-tartalom normális a felnőtteknél: a leukociták teljes számának 8-19% -a vagy 190-380 sejt / μl. Tartalmának növelésére B-limfociták következik be akut és krónikus bakteriális és gombás fertőzések, krónikus májbetegség, szisztémás kötőszöveti betegségek, krónikus limfocitás leukémia, myeloma multiplex.
• Koncentrációjának meghatározása immunglobulinok nespespetsificheskih (F, F, G, E) radiális immundiffú-, vagy turbometrii nefelometria, radioimmunológiai vagy enzim-immunoassay (EIA). Felnőttek normái: immunglobulin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Az immunglobulinok koncentrációjának növekedése ugyanazokkal a patológiás állapotokkal történik, amelyekben a B limfociták tartalmának növekedése bekövetkezik. Koncentráció csökkentésével immunglobulinok van veleszületett hypogammaglobulinaemiát, tumorok az immunrendszer, a lép eltávolítása, fehérje veszteség, a betegségek a vesék vagy a belekben, kezelés citosztatikumok és immunodepreesantami.

Módszerek meghatározása

• Keringő immunrendszer komplexek meghatározása a vérben szelektív kicsapással poliszilénglikolban, majd spektrofotometriás sűrűségvizsgálat (normál 80-20 UE). A keringő immunrendszer komplexjeinek növekedése jellemző az akut bakteriális, gombás, vírusos fertőzésekre, autoimmun, immunkomplex betegségekre, szérumbetegségre, 3-as típusú allergiás reakciókra;
• Meghatározása specifikus immunglobulinok vérben kapcsolatos bakteriális és virális antigének, a dezoxiribonukleinsav (DNS) autoimmun betegségek, az azonosító sperma (autoimmun meddőség) és protivopochechnyh antitestek (pyelonephritis és a glomerulonephritis) radiális immundiffúziós ELISA-val.
• Az antiszperm ellenanyagok meghatározása a spermiumban [MAR-teszt (kevert antiglobulin reakció)], a norma negatív.
• Az immunglobulinok vizeletben való koncentrációjának meghatározása a pielonephritis és a glomerulonephritis közötti differenciáldiagnózis (proteinuria szelektivitása) céljából.
• Az IgE meghatározása a prosztata lében allergiás prosztatitis diagnózisára radiális immunodiffúzióval vagy ELISA módszerrel. 
• Kutatási válaszul blasttransformation reakciója limfociták B egy B-sejt-mitogénnel (alkörmös mitogén stimulálása blasttransformation reakciója B-limfocita jelenlétében a T-limfociták), ahol a normál érték 95-100%.

Az immunitás T-sejtes kapcsolata

Szűrési módszerek

• Meghatározása a relatív és abszolút számú érett CD3 T-limfocita reakció immunfluoreszcenciával vagy átfolyásos citofluorometriával anti-SDZ monoklonális antitestek. Normál felnőttek 58-76%, vagy 1100-1700 sejt / ml. Számának csökkentése, a T-limfocita hibajeltábla-sejtes immunitás. Ez jellemző számos szekunder és primer immunhiányos (krónikus bakteriális és virális fertőzések: tuberculosis, szerzett immunhiány szindróma, rák, krónikus veseelégtelenség, a trauma, a stressz, az öregedés, alultápláltság, kezelés citotoxikus gyógyszerek, ionizáló sugárzás). Számának növelése T-limfociták a háttérben immun hiperaktivitás vagy limfoproliferatív betegségek. Ha a gyulladás a száma a T-limfociták először emeljük, majd csökkentjük. Nem csökken a T-limfociták azt sugallja, krónikus gyulladás.
• A limfociták alpopulációinak vizsgálata.
  • A T-segítő (anti-CD4 antitest) számának meghatározása. Általában 36-55% vagy 400-1100 sejt / μl. Számának növelése az ilyen sejtek történik autoimmun betegség, Waldenström-féle betegség, immun aktiváció antitransplantatsionnogo; számának csökkenése a T-helper sejtek előfordul krónikus bakteriális, vírusos, protozoon fertőzések, tuberkulózis, szerzett immunhiány szindróma, daganatok, égések, trauma, alultápláltság, öregedés, citosztatikumok kezelés, az ionizáló sugárzás.
  • A T-szuppresszorok (anti-CD4 antitest) számának meghatározása. Általában 17-37% vagy 300-700 sejt / μl. A T-szupresszorok számának növekedése ugyanolyan körülmények között történik, amikor a T-segítőek száma növekszik, és csökken a T-segítők száma, és csökken ugyanezen körülmények között.
  • Immunoregulációs index CD4 / CD8, az 1,5-2,5 normában. Hiperaktivitás több mint 2,5 (allergiás és autoimmun betegségek esetén); hipoaktivitás - kevesebb, mint 1,0 (a krónikus fertőzésekre való hajlam). A gyulladásos folyamat kezdetekor az immunoregulációs index emelkedik, és ha csökken, normalizálódik.

Módszerek meghatározása

• A természetes gyilkosok (NK sejtek) számának meghatározása - anti-CD16 és anti-CD56 antitestek. A CD16-limfociták normája 6-26%, CD56-9-19%. Számának növelése NK-sejtek fordul elő a graft kilökődés, csökken - a vírusos fertőzések, rák, az elsődleges és másodlagos immunhiányos, égések, trauma és a stressz, kezelés citosztatikumok és az ionizáló sugárzás. 
• A T-limfociták számának meghatározása az interleukin-2 receptorra (aktivációs marker) - anti-CD25 antitestekre. A norma 10-15%. A növekedés számuk volt megfigyelhető az allergiás betegségek, transzplantátum kilökődése, válaszul tímusz-függő antigénekre az akut primer fertőzés, a csökkentés - ugyanolyan betegségek, amelyek magukban foglalják számának csökkentése a NK-sejtek.
• Az aktivációs marker kifejeződése - a HLA-DR II. Osztályú hisztokompatibilitási molekula. A fokozott expresszió gyulladásos folyamatokban fordul elő hepatitis C, cöliákia, szifilisz, akut légúti fertőzések esetén.
• A limfociták apoptózisának értékelése. Erre utal a készségét limfocita apoptózis lehet azonosítani a expresszióját a felszíni Fas-receptor (CD95) a mitokondrium és a BD-2 protoonkogén. Az apoptózist értékeltük limfocita feldolgozása két fluoreszcens festékkel: propidium-jodid, amely kötődik a DNS-fragmentumok és annexin Y, kötődés foszfatidil-sejtmembránban megjelenő korai apoptózis. Az eredmények értékelését áramlási citofluoriméteren végezzük. Az eredmények kiszámítása a különböző színezékekkel festett sejtek arányán alapul. Festetlen sejtek életképes sejtek, kapcsolódó csak az Annexin az Y, - korai apoptózis jeleit, propidium-jodiddal és Annexin I - késői megnyilvánulásai apoptózis, festés csak propidium-jodidot jelzi nekrózis.
• A T-limfociták proliferációjának értékelése in vitro.
  • A sejt blasztogenezisének változása a limfociták robbanás-transzformációjának reakciója. A leukocitákat a növényi eredetű mitogénnel (lektinek) inkubáljuk. A leggyakrabban használt fitohemagglutinin 72 órán át, majd kenetet készítsen, foltja be és számolja a robbanások számát! A stimulációs indexet - az arány százalékában transzformált sejtek a kísérletben (kultúra PHA) a százalékos aránya transzformált sejtek a kontroll (kultúra nélkül PHA). A limfociták robbanás-transzformációjának reakcióját radioaktív címke (ZN-timidin) beoltásával lehet megítélni tenyésztett sejtekben, mivel a DNS-szintézis megnő a sejtek elosztásakor. A proliferatív válaszban bekövetkező zavarok mind a fertőzésekkel, onkológiai megbetegedésekkel, veseelégtelenséggel és sebészeti beavatkozásokkal kapcsolatos primer és másodlagos immunhiányosságokban fordulnak elő.
  • Értékelése ezek a tanulmányok, az expressziója aktivációs markerek (CD25, transzferrin receptor, hogy - CD71) molekulák és az MHC II HLA-DR, amelyek lényegében hiányoznak a nyugvó T-limfociták. T-limfociták stimulált fitohemagglutininnel 3 nap után expressziós aktivációs markerek analizáltuk közvetlen vagy közvetett immunfluoreszcenciával, áramlási citometriával a szekretált receptorok.
  • Mennyiségének mérésére mediátorok által szintetizált aktivált T-limfociták [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, a gamma-interferon, stb], radioimmun vagy ELISA-val. Különösen fontos az a koncentrációja becslés y-interferon és az IL-4 mind jelölők Th2 és a felülúszóban a kultúrák és aktivált intracellulárisan. Ha lehetséges, célszerű, hogy meghatározzuk a gén expresszióját a releváns citokin által a hírvivő ribonukleinsav a treonin-termelő sejt és a receptor expressziós intenzitások a megfelelő citokinek.
    
• A limfociták migrációjának gátlása. Szenzitizált T-limfociták az antigén felszabadulású limfokinekkel, beleértve a faktorokat. Gátolja a limfociták migrációját. A gátlás jelenségét figyeljük meg, amikor mitogéneket viszünk be a sejtek tenyészetébe. A gátlás mértékének vizsgálata lehetővé teszi a limfociták citokinek felszabadulásának képességét. Általában a migráció gyakorisága az adott mitogéntől függően 20-80%.
• Az NK sejtek citotoxicitásának értékelése. Határozzuk meg, hogy a természetes ölősejtek képesek megölni a K-562 eritromieloid vonal célsejtjeit. Ha ellenanyag-dependens citotoxicitást értékelünk, az IgG antitestekkel bevont célsejteket alkalmazzuk. A célsejteket 3H-uridinnel jelöljük, és effektorsejtekkel inkubáljuk. A célsejtek halálát a radioaktív címke felszabadulásával becsüljük meg. A citotoxicitás csökkentése rosszindulatú daganatokkal történik. Bizonyos esetekben, amikor az interleukin-kezelés hatékonyságának prognózisára van szükség, az NK sejtek citotoxicitását bizonyos citokinekkel inkubáltuk.

A fagociták működésének vizsgálata

Szűrési módszerek

A mikrobiális sejtek fagociták általi felszívódásának vizsgálata (latexrészecskék fagocitózisa, staphylococcus, Escherichia coli, vagy a betegből izolált mikroorganizmusok vizsgálati kultúrája). A centrifugálás, heparinnal kezelt vérből leukociták visszanyert szuszpenzióhoz hozzáadunk IV vérszérum az opszonizáció (opszoninok - fehérjék, amelyek fokozzák fagocitózis). A mikrobiális szuszpenziót hígítottuk, leukocitákkal kevertük és 120 percig inkubáltuk, az elemzéshez mintavételt az inkubálás kezdete után 30.90.120 perccel. A kiválasztott leukocita-szuszpenziókból kenetek keletkeznek. Határozza meg a következő fagocitózis mutatókat:

• fagocitikus index - a sejtek azon százalékos aránya, amelyek a fagocitózist 30 perc és 120 perc inkubációban léptették be; a fagocitikus index normatív értéke (30) a fagocitikus index 94% -a (120) - 92%;
• fagocitikus szám - az intracelluláris baktériumok átlagos száma; a fagocitaszám normatív értéke (30) 11%, fagocitikus szám (120) - 9,8%;  
• a fagocitaszám (30) és a fagocitaszám (120) fagocitikus számának koefficiense; normál 1,16;
• a neutrofilek baktericid indexe a fagocitákon belül elpusztult mikrobák számának az összes felvett mikrobák számához viszonyított aránya; 66% -os normában.

Módszerek meghatározása

• A fagociták baktériumellenes aktivitásának vizsgálata nitrozin-tetrazóliummal (NST) az NST teszt. A leukocitákhoz hozzáadjuk a dinitrogén-tetrazolium-sárga színezékét. Amikor a festéket a neutrofil felszívja, a redukció folyamata oxigén szabad gyökök hatására történik, ami kék festést eredményez. A reakciót 96 lyukú lapos fenekű lemezen végezzük. Az első három kutakban HCT és leukociták keverékével Hanks oldatot (spontán HCT) adunk hozzá, az utóbbi - latex részecskékben; inkubáljuk 37 ° C-on 25 percig. Az eredményeket az olvasó 540 nm-en olvassuk le és hagyományos egységekben fejezzük ki. Számítsuk ki a stimulációs tényezőt (K _st ), ami megegyezik a stimulált lyukak optikai sűrűségének arányával az injektálás nélküli lyukak átlagos optikai sűrűségével. Egészséges emberekben _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Adhéziós molekulák vizsgálata. Az áramlási citofluorimetriával meghatározzuk a CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 felületi antigének expresszióját. Az adhézió megsértésével járó immunhiányos állapotok a relapszusos fertőzésekkel, a sebek lassú gyógyulásával és a gén hiányában nyilvánulnak meg a fertőzés gócaiban.

A komplement rendszer vizsgálata

Szűrési módszerek

A komplement hemolitikus aktivitásának meghatározása - a komplement aktiváció klasszikus útjának vizsgálata. A páciens szérumának és egy egészséges személynek különböző hígításai adódnak az ellenanyagok által lefedett mellkas vörösvértestéhez. A hemolitikus aktivitás egy részét a szérum hígítás inverzének tekintjük, amelyben az eritrociták 50% -a elpusztul. A hemolízis mértékét fotometrikusan értékeljük a hemoglobin hozammal az oldatban. A komplement hemolitikus aktivitásának csökkentése a veseelégtelenségben, akut glomerulonephritisben szisztémás lupus erythematosusban figyelhető meg. Kombinált immunhiányosságok, myasthenia gravis, vírusos hepatitis, lymphomák, növekedés - obstruktív sárgaság, thyreoiditis Hashimoto. Reuma, reumás ízületi gyulladás, csomós periarteritis. Dermatomyositis, miokardiális infarktus, fekélyes vastagbélgyulladás, Reiter-szindróma, köszvény.

Módszerek meghatározása

• A komplement komponensek meghatározása. A kvantitatív meghatározást radiális immunodiffúzió és nefelometria módszerével végezzük.
  A vizsgálat nem informatív, hacsak a komplementkomponensek antigén tulajdonságait nem változtatják meg.
• Megállapították, hogy a komplement Clq-komponense fokozza a fagocitózist és közvetíti a sejtes citotoxicitást. Csökkentése immunbetegségek, szisztémás lupus erythematosus, gócos fertőzések és daganatok betegségeiben fordul elő.
• A C3-komponens részt vesz a klasszikus és alternatív komplementfolyam aktiválásában. A koncentrációjának csökkentése krónikus bakteriális és gombafertőzésekkel, keringő vagy szöveti immunkomplexek jelenlétével társul.
• A C4 komponens részt vesz a klasszikus út aktiválásában. A koncentrációjának csökkentése összefüggést mutat a komplement komplex komplexekkel való hosszú távú aktiválásával és a C1 inhibitor koncentrációjának csökkenésével, amely szabályozza a klasszikus komplement útvonal aktiválódását. A C4-es hiány a szisztémás lupus erythematosusban jelentkezik, a C4-es növekedés vesebetegséggel, transzplantációs kilökődéssel, akut gyulladással és a gyomor-bél traktus betegségeivel jár.
• A C5a a C5 molekula kicsi fragmense, amely a komplement rendszer aktiválásának következtében leválik. A koncentráció növekedése gyulladással, szepszisszel, atópiás és allergiás megbetegedésekkel jár.
• A Cl-inhibitor többfunkciós tényező. Kontrollálja a komplement C1 komponens aktiválódását, gátolja a kallikrein, a plazmin és az aktivált Hageman faktor aktivitását, Cls és Or. A C1-inhibitor hiánya angioödémához vezet.
• kiegészítő vizsgálatok. A standard szérumhoz, amely nincs komplementer komponenssel, a teszt szérumot adjuk hozzá, és meghatározzuk a komplement hemolitikus aktivitását. Ha a hemolitikus aktivitást nem állítják vissza normális állapotba, úgy gondolják, hogy a teszt szérumban a komplement komponens aktivitása csökken.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]