Bence-Jones fehérje

Az egészséges ember vizelete nem tartalmaz Bence-Jones fehérjét, amelyet az immunglobulinok könnyűláncai képviselnek, amelyeket rosszindulatú daganatos folyamatok kialakulása eredményeként észlelnek.

Számos kóros állapot (leggyakrabban a β-immunrendszerrel kapcsolatos problémák) diagnosztizálásához, valamint az alkalmazott terápia hatékonyságának meghatározásához laboratóriumi vizsgálatok szükségesek specifikus kis molekulatömegű fehérjék jelenlétére.

A Bence-Jones fehérjét feleslegben plazmasejtek termelik, a vérárammal együtt mozog, és a vizelettel ürül ki. A fehérjetestek ez utóbbi tulajdonsága teszi lehetővé a következő betegségek gyanúját a vizeletvizsgálat során:

• mielóma;
• oszteoszarkóma;
• plazmacitóma;
• krónikus limfocitás leukémia;
• limfogranulomatózis;
• primer amiloidózis;
• makroglobulinémia;
• idiápátiás monoklonális gammopátia.

Klinikailag igazolták egy specifikus fehérje felszabadulása és a későbbi veseműködési zavar közötti összefüggést, amelyet a fehérjetestek toxikus hatása okoz a vese tubulusok hámszerkezetére, ami viszont a disztrófia, a Fanconi-szindróma és a vese amiloidózis jelenségét okozza.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Bence Jones fehérje a vizeletben

A fehérje jelenlétét a vizeletben proteinuriának nevezik. Prerenális proteinurián nagy mennyiségű, kis molekulatömegű fehérje jelenlétét értjük a vizeletben. Ebben az esetben a vese szűrője és tubulusai nem károsodnak, és a normális veseműködés nem képes biztosítani a fehérjetestek reabszorpcióját. Az extrarenális (ál) proteinuria, azaz a vesefunkció károsodása nélkül jelentkező proteinuria fertőző vagy rosszindulatú folyamat jelenlétére utal a szervezetben. A mielómás betegek 60-90%-ánál proteinuria figyelhető meg. A kóros állapotok körülbelül 20%-a Bence-Jones mielóma.

A vizeletben található Bence-Jones fehérje a β-immunrendszer humorális eltolódásai miatt differenciálódik. A fehérjetestek megjelenése összefüggésben áll a mielóma patológiájával, a paraproteinémiás hemoblasztózisokkal, az endoteliózissal, a Waldenström-makroglobulinémiával, a nyirokleukémiával és az oszteoszarkómákkal. A Bence-Jones fehérje kimutatása a vizeletben fontos diagnosztikai és prognosztikai lépés. Alacsony molekulatömege miatt a Bence-Jones fehérje a vizelettel ürül, károsítva a vese tubulusok hámját, ami veseelégtelenség kialakulásával jár, ami halálhoz vezethet. A fehérje típus szerinti időben történő besorolása is fontos: a λ-fehérje nagyobb nefrotoxikus hatással rendelkezik, mint a κ.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Bence Jones fehérjevizsgálat

A szérumtól eltérő fehérjetestek jelenléte a vizeletben nyirokleukémiát, oszteoszarkómát vagy mielómát (a csontvelő daganatos folyamatait) jelezhet. A Bence-Jones fehérje, amikor a vizeletszűrletet 45-60ºC-ra melegítjük, zavaros üledék formájában kicsapódik, amely a kémcső falára rakódik le. A hőmérséklet további, forráspontig történő emelése feloldja a kivált zavarosságot.

A Bence-Jones fehérje kvantitatív vizsgálatát a következőképpen végezzük:

• részleges víz és részleges salétromsav felhasználásával reagensként;
• salétromsav (0,5-1 ml) elhelyezése egy kémcsőben, azonos mennyiségű vizsgálandó vizelet rétegezésével;
• az eredmény értékelése 2 perc elteltével (a folyékony közeg határán megjelenő vékony gyűrű 0,033% fehérjetest jelenlétét jelzi).

Egy fonalszerű gyűrű megfigyeléséhez a vizeletet 1:1 arányban kell vízzel hígítani, egy vastag gyűrű megjelenése azt jelzi, hogy a vizelet egy részét három rész vízzel kell összekeverni, tömör gyűrű esetén pedig a vizelet egy részét hét rész vízzel kell hígítani. A hígítást addig folytatjuk, amíg a vizsgálat 2-3. percében meg nem jelenik a jellegzetes üledék.

A fehérje mennyiségét úgy számítjuk ki, hogy a 0,033%-ot megszorozzuk a hígítási értékkel. Például, ha a vizeletet tízszeresére hígítottuk, a fehérjetestek gyűrűje a vizsgálat 3. percének végén jelent meg, akkor a fehérje százalékos beépülését a következőképpen számítjuk ki: 0,033x10=0,33.

Ha nincs üledék, akkor a zavarosság mértékét értékelik - a zavarosság kifejezett, gyenge vagy alig megkülönböztethető nyomai.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ]

Bence Jones fehérjeszekréció

A kiválasztott immunglobulin típusától függően megkülönböztetünk:

• könnyűlánc-patológiák (Bence Jones fehérje szekréció);
• glomerulopátia (más immunglobulinok szekréciója).

A vesekárosodás különböző kombinációi is lehetségesek. A gyakorlat azt mutatja, hogy a nephropathia a limfoproliferatív patológia (multiplex myeloma, krónikus limfocitás leukémia, Waldenström-kór stb.) következménye.

A véráramba kerülve, mint minden legfeljebb 40 kDa molekulatömegű fehérje, a könnyűláncok megkerülik a veseszűrőt, majd lizoszómákon keresztül oligopeptidekké és aminosavakká bomlanak. A könnyűláncok feleslege a katabolizmus reakciójának zavarát és a lizoszomális enzimek esetleges felszabadulását idézi elő, ami a tubulusszövet nekrózisát vonja maga után. A fehérjetestek a reabszorpció képtelenségéhez vezetnek, és amikor a monoklonális könnyűláncok Tamm-Horsfall fehérjével egyesülnek, fehérjehengerek alakulnak ki a disztális tubulusokban.

Bence Jones fehérje mielóma betegségben

A myeloma multiplex egy olyan kóros állapot, amelyben a szervezet könnyű immunglobulin láncokat termel teljes értékűek helyett. A betegség diagnózisát és az állapot monitorozását a vizelet laboratóriumi vizsgálata végzi, amely a fehérjetestek mennyiségi tartalmát mutatja. A myeloma altípus meghatározása a vérszérum elemzésén alapul. A betegség klinikai tünetei közé tartozik: csontfájdalom szindróma, vizelési zavar, ismeretlen eredetű vérömlenyek, folyadékretenció a szervezetben.

A mielómában a Bence-Jones-fehérjét standard vizsgálatokkal mutatják ki, amelyek a fehérjetestek mennyiségi tartalmát mutatják, és felmérik a vesekárosodás mértékét. A vizeletben található fehérje azonosítása magyarázza a hámréteg károsodását a vese stroma szklerózisával, amely idővel veseelégtelenséget okoz - a mielóma károsodása miatti halál gyakori oka (a Bence-Jones-fehérje teljesen eltömíti a tubulusokat, megakadályozva a vizelést).

A statisztikai adatok azt mutatják, hogy a mielóma differenciáltan jelentkezik 60 év feletti férfiaknál, akiknek genetikai hajlamuk van a kórtörténetükben, elhízásban és immunszuppresszióban szenvednek, valamint mérgező és radioaktív anyagoknak voltak kitéve.

[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Bence Jones fehérje meghatározása

Egy specifikus fehérje megkülönböztetéséhez laboratóriumi vizsgálatot végeznek a reggeli vizelet átlagos részéből (legalább 50 ml térfogat szükséges). A Bence-Jones fehérje jelenlétének kimutatása a mennyiségi komponens meghatározásával immunfixációs módszerrel lehetséges. A fehérjék elválasztása elektroforézissel történik, majd speciális szérumokkal immunfixálják. Amikor a fehérje immunglobulinok könnyű és nehéz láncainak antitestjeivel kötődik, immunkomplexek képződnek, amelyeket festéssel értékelnek.

Meg kell jegyezni, hogy még a minimális fehérjekoncentráció is kimutatható a szulfoszalicilsavra adott kicsapódási reakció miatt. A Bence-Jones fehérjét szűrt vizelet (4 ml) és acetátpuffer (1 ml) összekeverésével határozzuk meg. Pozitív mintával 60°C-ra történő vízfürdőben történő melegítés és 15 perces ott tartás után jellegzetes üledék képződik. Ez a módszer tekinthető a legmegbízhatóbbnak. A túlzottan savas vagy lúgos környezet és a vizelet alacsony relatív sűrűsége negatívan befolyásolhatja az elemzés eredményeit.

Azok a kutatási módszerek, amelyekben a Bence-Jones fehérjét 100°C-ra történő melegítéssel oldják, vagy hűtés hatására újra kicsapják, megbízhatatlanok, mivel nem minden fehérjeelem rendelkezik a megfelelő tulajdonságokkal. Az indikátorpapír használata azonban teljesen alkalmatlan a Bence-Jones fehérje kimutatására.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]